[发明专利]一种多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌及应用

说明书

本发明提供一种多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌。该菌属于Thiobacimonas属，已保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.1.12377。其应用步骤如下：（1）将菌株涂布于2216E培养基平板上，纯化后，接入种子培养基RO中，摇床培养至对数生长期，得种子液；（2）将种子液转接五种代表菌株营不同代谢方式的培养基，再摇床培养至近平台期；（3）经离心收集近平台期的菌体并冷冻干燥，加入氯仿、次氯酸钠溶液得三相混合物，过滤得溶有聚羟基脂肪酸酯的氯仿成分，用冷甲醇法析出产物。该菌株在数种培养条件下聚羟基脂肪酸酯所占细菌干重的比例最高可达8.83%±0.12%。

技术领域

本发明属于海洋微生物技术领域，具体涉及一株产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌及应用。

背景技术

聚羟基脂肪酸酯首先是作为传统塑料的代替品出现的，它具有生物相容性、光学活性、热塑性和完全生物降解性等特性，是具有巨大应用前景的生物绿色高分子材料，被认为将来最有可能代替源于石化工业的传统塑料，在工业及医学领域已获得广泛利用。微生物在聚羟基脂肪酸酯的生物合成中起着重要作用，一些微生物可产生聚羟基脂肪酸酯作为胞内能量及碳源储藏物质。目前大幅度降低聚羟基脂肪酸酯的生产成本已成为国内外研究者的关注热点。本技术中该海洋细菌可营多种营养方式，尤其在自养条件下可以从硫氧化中获取能量固定无机碳源诸如二氧化碳，即“变废为宝”地积累聚羟基脂肪酸酯，大大降低了产聚羟基脂肪酸酯的工艺成本，并对研究开发海洋生物资源具有重要意义。

CN201310572845.3公开了两种细菌混合培养生产聚羟基脂肪酸酯的方法，该方法是：细菌1175（芽孢杆菌属）和WN-H₄1（伯克氏菌属）分别接种到发酵培养基中培养18h。先接种细菌1175，发酵培养24h；再补接WN-H₄1，继续发酵48h终止（总接种量为10％，1175／WN-H₄1=1／2）。在培养基未完全优化的情况下，聚羟基脂肪酸酯（PHA）的提取率在40%以上，GPC检测Mn=1.12×10⁵，PDI=1.16。

JLT2016为白色革兰氏阴性海洋细菌。基于全基因组测序结果发现其具有异养代谢中心糖酵解途径及三羧酸循环途径的关键基因，同时还具有固定二氧化碳的卡尔文循环的关键酶以及无机硫氧化酶的相关基因，即具有自养、异养及混养的代谢能力，并产生聚羟基脂肪酸酯作为胞内储能物质，其多样化的代谢方式对研究降低产聚羟基脂肪酸酯工艺成本具有重要意义。

发明内容

本发明目的是提供一株多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌（Thiobacimonas profunda）JLT2016。

本发明另一目的是提供多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌（Thiobacimonas profunda）JLT2016的应用。

JLT2016，已于2017年06月22日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰路1号院3号，保藏号为：CGMCC No.1.12377。JLT2016为白色革兰氏阴性海洋细菌。从其基因组信息发现，其具有营自养、异养和混养营养方式的代谢多样性。

所述多样性代谢产聚羟基脂肪酸酯的海洋细菌（Thiobacimonas profunda）JLT2016在产聚羟基脂肪酸酯的应用。

所述产聚羟基脂肪酸酯的应用，步骤如下：

（1）将菌株从保种管中取100μl涂布于2216E平板上，经过2-3次的纯化，接入种子培养基RO中，在28℃，160rpm摇床培养24h至对数生长期，得种子液；

（2）2%接种量的种子液转接至五种代表菌株营不同代谢方式的培养基，在28℃，160rpm摇床培养至近平台期；