[发明专利]一种鉴别韭菜子和葱子的方法

权利要求书

1.一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：采用限制性内切酶Rsa I分别对待检测样品的核糖体DNA的内转录间隔区序列进行酶切，酶切前后内转录间隔区序列长度基本保持不变的是葱子；酶切前后内转录间隔区序列发生断裂的为韭菜子；

鉴别方法包括以下步骤：

(1)提取待检测样品的DNA；

(2)对提取的DNA进行扩增反应得到扩增产物；

扩增反应的引物序列为：上游引物序列ATGCGATACTTGGTGTGAAT和下游引物序列GACGCTTCTCCAGACTACAAT；

(3)采用限制性内切酶Rsa I对扩增产物进行酶切反应，得到酶切产物；

(4)检测扩增产物与酶切产物的序列长度，若酶切产物与扩增产物检测结果相同或基本相同，则待检测样品为葱子；若酶切产物序列长度明显短于扩增产物序列长度，则待检测样品为韭菜子。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：所述的核糖体DNA的内转录间隔区序列为ITS2序列。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：步骤(2)中扩增反应条件为：94℃预变性5min，变性94℃30s，退火56℃30s，延伸72℃45s，40个循环；最后72℃延伸10min。

4.根据权利要求1所述的一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：步骤(3)中酶切反应的条件为：37℃水浴锅反应50min，10×Loading Buffer 2μL终止反应。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：步骤(4)中采用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物与酶切产物的序列长度。

6.根据权利要求5所述的一种鉴别韭菜子和葱子的方法，其特征在于：步骤(4)中：韭菜子扩增产物的序列长度为500bp左右，酶切产物的序列长度在200～300bp之间；葱子酶切产物与扩增产物的序列长度均在500bp左右。

7.用于鉴别韭菜子和葱子的试剂盒，其特征在于：包括DNA提取试剂、PCR扩增上游引物序列ATGCGATACTTGGTGTGAAT、下游引物序列GACGCTTCTCCAGACTACAAT和限制性内切酶RsaI。