[发明专利]一种鉴别韭菜子和葱子的方法

说明书

本发明公开了一种鉴别韭菜子和葱子的方法，属于DNA鉴别技术领域球，其解决了现有技术难以鉴别韭菜子中是否采用葱子冒充或掺杂葱子问题。本发明通过对待鉴定样品的DNA提取、PCR扩增、PCR产物的酶切和琼脂糖凝胶电泳后，酶切后韭菜子样品电泳鉴定结果为在200～300bp之间出现两条带位；葱子样品电泳鉴定结果为在500bp左右出现一条带位，具有准确、快速、价廉和重现性好等优点。

技术领域

本发明属于DNA鉴别技术领域，具体地说，涉及一种鉴别韭菜子和葱子的方法。

背景技术

韭菜籽最早出自《名医别录》，为百合科植物韭菜Allium tuberosum Rottler的干燥成熟种子，适当食用可调节人体肝肾缺乏，具有补肝肾，暖腰膝，壮肾阳的功用。葱子是百合科葱属植物葱Allium fistulosum L的种子。为多年生草本植物，主治补肾明目，常用于用于肾虚、阳痿、目眩。两者性状较相似，通常肉眼很难区分，易混淆，而且两者常互为对方的混淆品，其功能虽有近似，但毕竟不完全相同，不能等同应用，必须加以区别；且由于葱子的市场价格远低于韭菜子，近来市场上频繁出现以葱子冒充韭菜子的现象，因而迫切需要一种区分韭菜子和葱子的方法。

中药材的传统鉴别模式一直是“以性状鉴别为基础，以经验鉴别为导向”。但经验丰富的“老药工”已是凤毛麟角，其丰富的中药材鉴别经验无法得到广泛的传承已成为中药材鉴别领域发展的瓶颈。近年来，随着分子生物学技术在中药材鉴定领域应用的逐步深入，根据药材DNA进行鉴别为传统的中药材鉴定行业提供了新的技术和方法，实现了对中药材成分与真伪的快速鉴定。每个物种的DNA序列都是唯一的，与传统的鉴定方法相比较，用DNA片段作为物种进行鉴定，不受个体形态、大小等特征和完整性的影响，能直接从基因水平上提供丰富的鉴别依据，可以实现对中药材原植物、饮片、粉末以及细胞、组织等材料来源的准确鉴定，更具有客观性与权威性。

其中，DNA条形码技术是通过对一个标准目的基因的DNA短片段进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。DNA条码概念是2003年由加拿大动物学家Paul Hebert首先提出，利用有足够变异且容易扩增的相对较短的标准DNA片段，在种内的特异性与种间的多样性中建立的一种新的生物身份识别系统，从而实现了对物种进行快速、准确的识别和鉴定。DNA条形码不受生长发育阶段、供试部位、环境条件的影响，直接利用DNA序列进行物种的鉴定，具有独一无二的准确性和可重复性，且所用引物少，稳定性及通用性高，实验过程标准化，并可通过数据库实现共享并可将DNA序列转换成二维条形码图像应用于实践。该方法首先需要提取植物DNA，再进行PCR扩增，通过对扩增产物测序和比对才能判断该植物的种类，不适合快速鉴定。而PCR-RFLP技术通过对待鉴定样品的DNA提取，PCR扩增，PCR产物的酶切，琼脂糖凝胶电泳就能得到鉴定结果，具有准确、快速、价廉和重现性好等优点。因此，通过PCR-RFLP技术对物种进行基因鉴定具有无可比拟的优势。

目前，用于区分韭菜子和葱子的常用方法为显微鉴别，观察其细微特征用于区分，该方法费时费力，而且主观性很强，没有一个有效、快速客观的检测手段。王仁堂和王广山在《韭菜子与葱子的蛋白电泳分析》中公开了一种快速鉴别韭菜子与葱子的方法，其利用醋酸纤维素薄膜电泳技术，对二者进行了蛋白电泳分析，即可鉴别韭菜子与葱子，但是蛋白质电泳成本大，难度高，时间久，不利于广泛推广。而本发明提供的一种鉴别韭菜子与葱子的方法就能弥补目前检测手段的不足，其主要利用PCR-RFLP技术，通过对待鉴定样品的DNA提取，PCR扩增，PCR产物的酶切，琼脂糖凝胶电泳就能快速地得到鉴定结果。PCR-RFLP用于近缘种的鉴别已有一些成功范例，但这种鉴别对不同的物种，所用的引物、PCR扩增条件、限制性内切酶的种类及鉴别方法都不相同。目前尚没有应用PCR-RFLP技术对韭菜子进行分子鉴别的报道。