[发明专利]一种发酵生产盐霉素的方法

权利要求书

1.一种发酵生产盐霉素的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)一级种子培养：将产盐霉素的链霉菌的孢子或菌丝体接种于一级种子培养基中，进行一级培养得到一级种子液；

(2)二级种子培养：将步骤(1)中得到的一级种子液接种于二级种子培养基中，进行二级培养得到二级种子液；

(3)发酵培养：将步骤(2)中得到的二级种子液接种于发酵培养基中，进行发酵培养，得到盐霉素发酵液；

所述步骤(1)的一级种子培养基中还含有阿拉伯胶和硅油，其含量均为0.01-0.1g/L；

所述步骤(2)的二级种子培养基中还含有十二烷基苯磺酸钠和硬脂酸镁，其含量均为0.01-0.1g/L。

2.根据权利要求1所述的一种发酵生产盐霉素的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的接种的接种量为1-6％；

步骤(1)中所述的一级种子培养基的成分及用量为葡萄糖15g/L，黄豆粉18g/L，玉米浆20g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，酵母膏粉0.3g/L和碳酸钙0.2g/L；pH为6.5-7.0；

步骤(1)中所述的一级培养在容积为5-10L的种子发酵罐中进行；一级种子发酵罐的装液量为其容积的15-35％；

步骤(1)中所述的一级培养的条件为：罐温为28-32℃，搅拌转速为250-300r/min，罐压为0.05-0.08MPa，空气流量为0.5-0.8vvm，培养时间为10-14h。

3.根据权利要求1所述的一种发酵生产盐霉素的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的接种的接种量为4-10％；

步骤(2)中所述的二级种子培养基的成分及用量为葡萄糖20g/L，黄豆粉10g/L，玉米浆15g/L，磷酸二氢钾2.0g/L，酵母膏粉0.4g/L和碳酸钙0.2g/L；pH为6.5-7.0；

步骤(2)中所述的二级培养在容积为5-10L的种子发酵罐中进行；二级种子发酵罐的装液量为其容积的12-30％；

步骤(2)中所述的二级培养的条件为：罐温为30-33℃，搅拌转速为200-300r/min，罐压为0.05-0.08MPa，空气流量为0.1-1.2vvm，培养时间为12-16h。

4.根据权利要求1所述的一种发酵生产盐霉素的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的接种的接种量为8-15％；

步骤(3)中所述的发酵培养基的成分及用量为蔗糖15.0g/L，葡萄糖10.0g/L，黄豆粉8.0g/L，玉米淀粉5.0g/L，酒石酸2.0g/L，氯化铁2.0g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁2.0g/L，氯化钠0.1g/L和豆油150g/L；pH为6.5-7.0；

步骤(3)中所述的发酵培养在容积为50L的发酵罐中进行；发酵罐的装液量为其容积的50-75％；

步骤(3)中所述的发酵培养的条件为：罐温为30-33℃，搅拌转速为250-300r/min，罐压为0.05-0.08MPa，空气流量为0.5-1.5vvm，培养时间为5-10d。

5.一种从权利要求1-4任一项所述的盐霉素发酵液中提取盐霉素的方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)将盐霉素发酵液酸化，调节pH为4.5-6，后向酸化的发酵液中加入絮凝剂，在20-40℃下保温15-30分钟后得到絮凝后的混合物A；

(2)向步骤(1)中得到的混合物A中加入助滤剂搅拌均匀后在2℃下进行真空处理，后超声得到混合物B，将混合物B转入板框压滤机中进行过滤，弃去滤液，得到滤饼C；

(3)将步骤(2)中得到的滤饼C进行闪蒸干燥，得到菌粉D；

(4)将步骤(3)中得到的菌粉D用乙醇溶液浸提两次，合并两次浸提得到的浸提液，得到浸提液E；

(5)向步骤(4)得到的浸提液E中加入活性炭进行脱色，将脱色后的浸提液过滤去除活性炭后，浓缩并进行降温结晶得到盐霉素湿晶体F；

(6)将步骤(5)中得到的盐霉素湿晶体F转入双锥干燥机减压烘干，即可得到高纯度的盐霉素晶体。