[发明专利]一种高效稳定的细胞表达载体、表达系统及其制备方法、应用

说明书

本发明涉及一种高效稳定的细胞表达载体、表达系统及其制备方法、应用，属于基因工程技术领域。本发明中的细胞表达载体包含MAR from the DHFR intron序列，该段序列具有普通MAR序列和内含子的双重功能，能更好的提高CHO细胞中外源蛋白表达水平，由其构建得到的表达载体能驱动目的基因高效、持续、稳定表达，同等条件下，与不含MAR from the DHFR intron序列及包含来自CHO细胞的MAR‑6序列的表达载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。

技术领域

本发明涉及一种高效稳定的细胞表达载体、表达系统及其制备方法、应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

生物制药是21世纪高科技产业，治疗性重组蛋白的生产是生物制药的一个重要部分。随着社会的发展，对重组治疗蛋白的需求大幅度增加。其中近70％都是用中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞表达系统生产的，因为其具有转录后修饰能力，这些细胞产生的蛋白质在分子结构、理化性质和生物学功能上更接近于天然分子。

重组蛋白表达水平低或转基因沉默是目前重组蛋白生产中的常见问题。为了克服这些问题，可以应用一些基因调控元件，如绝缘子、染色质开放元件、达增强序列元件、抗阻遏元件、核基质附着区(MARs)等提高重组蛋白的产量。MARs序列富含AT碱基对(＞60％)，以及几个短的“共有序列”，如A-box(AATAAAYAAA)、T-box(TTWTWTTWTT)、DNA链解旋序列(AATATATTT或AATATT)、拓扑异构酶II结合位点(GTNWAYATTNATNNR)等。已有研究表明，MARs能增强转基因表达，克服转基因沉默并且有助于将染色质结构锚定到核基质上(Zhao CP,Guo X,Chen SJ,et al.Matrix attachment region combinations increase transgeneexpression in transfected Chinese hamster ovary cells.Sci Rep.2017；7:42805)(Gorman C,Arope S,Grandjean M.Use of MAR elements to increase the productionof recombinant protenins.Cell Eng.2009；6:1-32.)(Allen GC,Spiker S,ThompsonWF.Use of matrix attachment regions(MARs)to minimize transgenesilencing.Plant Mol Biol.2000；43:361-76)。