[发明专利]一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201810293790.5 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108486154A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 邵敬伟;张冰晨 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊;饶文君 |
| 地址： | 350108 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 唾液酸酶基因 恶性转化 敲除小鼠 构建 敲除 肿瘤 新型抗肿瘤药物 病理生理过程 生物技术领域 显微注射技术 小鼠基因组 受精卵 关键步骤 过程研究 基因重组 细胞癌变 质粒载体 肿瘤细胞 重要标志 二倍体 唾液酸 靶向 小鼠 研发 研究 应用 体内 成功 | ||
1.一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，基于CRISPR/Cas9技术，选取Px459 vector，设计靶向NPL基因sgRNA，通过酶切连接得到重组Px459质粒，再将重组质粒注射入受精卵中，获得唾液酸酶基因敲除小鼠。
2.根据权利要求1所述的一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述重组Px459质粒的构建方法为：
1）根据NPL基因CDS区序列，设计靶向NPL基因sgRNA，得到NPL-sgRNA；
2）合成NPL-sgRNA正向及反向寡核苷酸序列，合成时在两端加上BbsI酶切位点；通过梯度退火形成双链寡核苷酸；
3）将BbsI酶切后的Px459质粒载体回收，通过T4连接酶与双链NPL-gRNA连接形成重组基因敲除载体；转化感受态菌种单克隆挑取测序得到所需NPL-gRNA/Cas9重组敲除CRISPR载体，即重组Px459质粒。
3.根据权利要求2所述的一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述的NPL-sgRNA序列为：GGTGTCCGCGGCGGAATCCG。
4.根据权利要求2所述的一种唾液酸酶基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，NPL-sgRNA正向及反向寡核苷酸序列为：
正链F:CACCGGGTGTCCGCGGCGGAATCCG ；
反链R:AAACCCGGATTCCGCCGCGGACACC。
5.如权利要求1所述的方法构建获得的唾液酸酶基因敲除小鼠。
6.如权利要求1所述的唾液酸酶基因敲除小鼠在制备抗肿瘤药物中的应用。
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