[发明专利]一组环γ-聚谷氨酸系列分子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一组环γ-聚谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述的环γ-聚谷氨酸，其氨基酸序列N→C分别如下所示：

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

cyclo[(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)-(γ-E)]；

所述的制备方法包括以下步骤：

A)越前水母刺丝囊提取液制备

水母触手组织加入等体积0.5M氯化镁溶液，4℃下自溶4天，用80目筛网过滤去除组织碎片，滤液2000×g离心5min，弃上清，沉淀加入10ml氯化镁溶液复溶；将浓度分别为90％，70％，50％，30％的Percoll悬液各2ml铺管，吸取复溶后触手样品2ml上样，280×g密度梯度离心20min；离心后收集底层沉淀，镜下观察为大型未发射的刺丝囊；将洗净的刺丝囊转移至破碎管，利用组织研磨器在4600rpm转速下破碎10min，每破碎30s，将破碎管取出置于冰水中冷却1min，破碎完毕后10000×g离心10min，收集上清即为水母刺丝囊提取液；

上述操作都在0-4℃条件下进行；

B)水母刺丝囊提取液初步分离

水母刺丝囊提取液用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液过HiTrap Desalting柱初步分离，用纯水洗脱，流速5ml/min，280nm波长的紫外检测器同步检测；电喷雾质谱法检测得知，其中流出体积4-6ml内的组分含有大量所述环γ-聚谷氨酸系列小分子；

C)C18柱反向高效液相层析

将上述流出体积4-6ml组分冻干，溶于0.1％的TFA水中，利用HPLC反相C18柱进一步纯化，以含0.1％TFA的水和含0.1％TFA的乙腈构成的洗脱系统进行线性梯度洗脱，收集洗脱时间12-20min之间的一系列洗脱峰，即得到一系列所述的环γ-聚谷氨酸系列小分子。