[发明专利]一种肝素类药物生物效价的测定方法

权利要求书

1.一种肝素类药物生物效价的测定方法，其特征在于，其包括：

将凝血因子与待测药物、抗凝血酶III以及所述凝血因子所对应的特异性底物混合，构建体外抗凝血因子的效价体系；

通过高效液相色谱-质谱联用分析法测定所述效价体系中反应产物的含量；

以已知效价的肝素类药物为标准品，根据量反应平行线法计算所述待测药物的生物效价；

所述待测药物的生物效价P_T按照下式计算：

P_T＝P_S×(S_T/S_S)

式中，P_S为肝素类药物标准品的生物效价；S_T和S_S分别为待测药物的斜率和标准品的斜率；

高效液相色谱-质谱联用分析包括在线样品前处理系统和高效液相色谱-质谱联用系统，所述在线样品前处理系统包括依次连接的第一泵体、自动进样器、多通阀、前处理色谱柱、多通阀和废液收集器，所述高效液相色谱-质谱联用系统通过所述多通阀与所述前处理色谱柱连接或断开；

所述在线样品前处理系统中，所述前处理色谱柱为反相色谱柱，流动相为甲醇-水，流速为0.3-0.8mL·min^-1；进样量为1-20μL；冲洗时间为0.5-1.5分钟；

所述高效液相色谱-质谱联用体系中质谱采用电喷雾质谱正离子模式，干燥气温度为250-350℃，雾化器压力为20-60psi，毛细管电压为3000-4500V，毛细管出口电压为50-150V，干燥气流速为4-12L·min^-1；

所述高效液相色谱-质谱联用系统中液相色谱的条件包括：所述分析色谱柱为反向色谱柱，流动相的流速为0.1-0.5mL·min^-1；分析时间为3-10分钟。

2.根据权利要求1所述的肝素类药物生物效价的测定方法，其特征在于，体外抗凝血因子的所述效价体系的构建方法包括：

先将所述待测药物与抗凝血酶III混合，再加入所述凝血因子和所述特异性底物，混合反应3-7分钟后，加入淬灭剂，制得供试品。

3.根据权利要求1所述的肝素类药物生物效价的测定方法，其特征在于，所述凝血因子包括凝血因子IIa、凝血因子VIIa、凝血因子IXa、凝血因子Xa、凝血因子XIa和凝血因子XIIa中的任意一个。

4.根据权利要求1所述的肝素类药物生物效价的测定方法，其特征在于，利用所述高效液相色谱-质谱联用分析法检测反应产物的方法包括：

利用自动进样器进样，采用有机溶剂-水体系洗脱所述前处理色谱柱，洗脱液进入所述废液收集器；随后，切换所述多通阀，使所述液相色谱的第二泵体与所述前处理色谱柱连通，以甲醇-水溶剂体系依次洗脱所述前处理色谱柱和分析色谱柱，洗脱液进入质谱检测器进行分析。

5.根据权利要求1所述的肝素类药物生物效价的测定方法，其特征在于，所述多通阀的接口数量大于6且为偶数个。