[发明专利]一种提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法

权利要求书

1.一种提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将小单孢菌种接种至分离纯化培养基中，培养13d，得到直径为4-6mm，高度为3-4mm的小单孢菌单菌落；所述分离纯化培养基由以下配方配置而成：

可溶性淀粉7.0-8.0g/L；氯化钠0.3-0.7g/L；磷酸二氢钾0.2-0.4g/L；硝酸钠0.8-1.2g/L；碳酸钙0.8-1.2g/L；琼脂粉15-19g/L；

步骤2：将分离纯化培养得到的小单孢菌单菌落接种至斜面培养基，培养11d，得到新鲜的斜面孢子；所述斜面培养基由以下配方配置而成：

可溶性淀粉7.0-8.0g/L；氯化钠0.3-0.7g/L；磷酸二氢钾0.2-0.4g/L；硝酸钠0.8-1.2g/L；碳酸钙0.8-1.2g/L；琼脂粉15-19g/L；

步骤3：对步骤2中制得的新鲜的斜面孢子进行冷藏，所述冷藏的温度为4℃，所述冷藏的时间为20-40d；

步骤4：将经过冷藏的斜面孢子接种至种子培养基，培养40h，得到第一菌液；所述种子培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉8.0-12.0g/L；硝酸钠0.3-0.7g/L；黄豆饼粉8.0-12.0g/L；大豆蛋白胨1.0-3.0g/L；葡萄糖0.8-1.2g/L；碳酸钙5.0-7.0g/L；

步骤5：将经过种子培养基培养制得的第一菌液接种至发酵培养基，培养120h，得到第二菌液，所述第二菌液为提高庆大霉素产量的小单孢菌；所述发酵培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉53.0-57.0g/L；硝酸钠0.8-1.2g/L；黄豆饼粉33.0-37.0g/L；大豆蛋白胨6.3-6.7g/L；葡萄糖0.8-1.2g/L；碳酸钙6.3-6.7g/L。

2.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述步骤3中，所述冷藏的时间为30d。

3.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述步骤2中的斜面培养基培养温度为36.9℃，pH值为7.1。

4.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述步骤1中，分离纯化培养基的培养温度为36.9℃，pH值为7.1。

5.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述步骤4中，种子培养基的培养温度为34.5℃，pH值为7.1，培养转速为220rpm。

6.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述步骤5中，发酵培养基的培养温度为34.5℃，所述发酵培养基的pH值为7.1，培养转速为220rpm。

7.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述斜面培养基由以下配方配置而成：

可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L。

8.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述种子培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉10.0g/L；硝酸钠0.5g/L；黄豆饼粉10.0g/L；大豆蛋白胨2.0g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.0g/L。

9.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，所述发酵培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉55.0g/L；硝酸钠1.0g/L；黄豆饼粉35.0g/L；大豆蛋白胨6.5g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.5g/L。

10.根据权利要求1所述的提高庆大霉素产量的小单孢菌培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将小单孢菌种接种至分离纯化培养基中，培养13d，得到直径为4-6mm，高度为3-4mm的小单孢菌单菌落；所述分离纯化培养基由以下配方配置而成：

可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L；

所述斜面培养基培养温度为36.9℃，pH值为7.1；

步骤2：将分离纯化培养得到的小单孢菌单菌落接种至斜面培养基，培养11d，得到第一菌落；所述斜面培养基由以下配方配置而成：

可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L；

步骤3：对步骤:2中制得的新鲜的斜面孢子进行冷藏，所述冷藏的温度为4℃，所述冷藏的时间为30d；

步骤4：将经过斜面培养基培养制得的第一菌落接种至种子培养基，培养40h，得到第一菌液；所述种子培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉10.0g/L；硝酸钠0.5g/L；黄豆饼粉10.0g/L；大豆蛋白胨2.0g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.0g/L；

所述种子培养基的培养温度为34.5℃，pH值为7.1，培养转速为220rpm；

步骤5：将经过种子培养基培养制得的第一菌液接种至发酵培养基，培养120h，得到第二菌液，所述第二菌液为提高庆大霉素产量的小单孢菌；；所述发酵培养基由以下配方配置而成：

玉米淀粉55.0g/L；硝酸钠1.0g/L；黄豆饼粉35.0g/L；大豆蛋白胨6.5g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.5g/L；

所述发酵培养基的培养温度为34.5℃，所述发酵培养基的pH值为7.1，培养转速为220rpm。