[发明专利]一种小麦醇溶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一种小麦醇溶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明一株小麦醇溶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株CS6‑1，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.14687。本发明获得了能够分泌小麦醇溶蛋白单单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以细胞株CS6‑1分泌的抗体4F2为包被抗体，抗体4F2标记HRP后为酶标抗体(4F2‑HRP)，以小麦醇溶蛋白为标准品建立了检测小麦醇溶蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法，在检测食品过敏原中的应用，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一种小麦醇溶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

小麦醇溶蛋白是分子量为22-58kDa的单体蛋白质，是小麦蛋白的主要成分。醇溶蛋白是小麦等谷物类的主要过敏原，小麦过敏会影响皮肤、内脏、呼吸道的健康，引起运动激发过敏症、职业哮喘、鼻炎、接触性荨麻症、乳糜泻肠炎、麻风皮肤病等。乳糜泻肠炎是遗传易感患者摄入小麦麸质后不能耐受所致的慢性小肠吸收不良综合症，并且目前认为醇溶蛋白是乳糜泻患者的主要诱因。食物过敏已成为一个公众性的食品安全问题。食物过敏是人类常见的一种免疫性疾病，主要是由食物中蛋白质引起，由IgE介导的Ⅰ型超敏反应，其临床症状主要有水肿、皮炎、哮喘以及肠道综合症等，严重时会引发休克甚至危及生命，复杂食物样品中微量过敏原的检测和定量成为当务之急。目前体外针对微量过敏原的检测方法有免疫学方法、蛋白组学法、PCR法、化学发光免疫方法。虽然目前有关过敏原检测的方法很多,但都存在各自不同的问题,如检测速度慢、成本高、检测需要特定的分析仪器等,制约了食品中过敏原检测方法的发展。因此实现准确、安全、经济、快速、高通量、高灵敏的体外检测技术方法具有现实意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供小麦醇溶蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14687，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明的第二个目的是提供小麦醇溶蛋白单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.14687的单克隆细胞株分泌产生。

本发明的第三个目的是提供所述小麦醇溶蛋白单克隆抗体的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于食品中小麦醇溶蛋白的分析检测。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是制备ELISA竞争法检测小麦醇溶蛋白的试剂。

本发明的第四个目的是提供所述单克隆细胞株的制备方法，所述方法是用小麦醇溶蛋白免疫动物，从动物体内分离多克隆抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述小麦醇溶蛋白杂交瘤细胞株是按如下方法制备的：

(1)动物免疫与效价测定：采用小剂量短周期方案免疫健康BALB/c雌性小鼠，首次免疫用100μg小麦醇溶蛋白与等量弗氏完全佐剂混匀后进行皮下注射，间隔3周后，再用100μg小麦醇溶蛋白与等量弗氏不完全佐剂加强免疫，此后每隔3周用半量小麦醇溶蛋白加强免疫一次；冲刺免疫剂量减半，与等体积的生理盐水混合后采用腹腔免疫，用小麦醇溶蛋白作为包被抗原，通过直接ELISA法检测血清效价；

其具体ELISA程序如下：

1)包被：将包被抗原用0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液梯度稀释，100μL/孔，37℃孵育2h；

2)洗涤：将板内溶液倾去，每孔注入200μL PBST溶液，置于摇床上振荡3min，甩干，洗涤3次；以下洗涤方法相同；

3)封闭：拍干后，加入200μL/孔封闭液，37℃孵育2h，洗涤后烘干备用；