[发明专利]采用DNA及PCR技术鉴定新鲜牛肉贮藏时间的方法

说明书

本发明公开了一种采用DNA及PCR技术鉴定新鲜牛肉贮藏时间的方法，不同贮藏条件(冻藏‑20℃、冷藏4℃、中温10℃和室温20℃)下牛肉，通过分离提取其中牛DNA，测定牛DNA含量，确定该牛肉所处新鲜程度(一级鲜肉、二级鲜肉和变质肉)；再以此DNA为模板进行荧光定量PCR扩增，根据不同贮藏温度、不同新鲜程度下牛肉所处时间与荧光定量PCR扩增的ct值差的数学方程，精确判断牛肉中所贮藏放置的时间，为牛肉在不同温度下放置时间的鉴别提供一种新方法。本发明操作简单、精确度高、应用前景广阔，对于牛肉的质量安全检测具有重要的意义，有利于肉品加工企业和广大消费者根据贮藏时间选择牛肉原料。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种采用DNA及PCR技术鉴定新鲜牛肉贮藏时间的方法。

背景技术

牛肉具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等特点，营养丰富，一直是发达国家肉类消费的首选，而我国的牛肉消费量也在逐年升高。2015年“僵尸肉”事件的发生，引起了社会广泛关注，肉类品质安全及贮藏时间倍受重视。然而，畜禽肉类贮藏保质期尚无标准明确要求，仅有《鲜冻分割牛肉》GB/T 17238-2008中规定：“冻分割牛肉应贮存在低于-18℃的冷藏库内，贮存不超过12个月”，不过这仅是个推荐性标准，没有强制要求冻牛肉的保质期为12个月。对于其他贮藏温度，也同样没有贮藏标准可循。尤其是，对于牛肉贮藏在没有记录的情况下，目前没有发现对贮藏时间的研究报道。尤其是冷冻和冷藏牛肉贮藏时间的判定就比较重要了。

目前，冷冻贮藏是肉类最有效的方法之一，能抑制微生物的污染，延长保质期，但由于冻藏期间冰晶的形成、水分升华、蛋白质变性、脂肪氧化等，降低了肉的品质；冷藏贮藏期间牛肉的保质期相对较短且肉品质随着贮藏时间延长而降低；家庭常见的室温条件下贮藏，肉的保质期较短，受到微生物的污染和自身酶的作用容易导致畜肉腐败变质。在不同温度下贮藏，随贮藏时间的延长肉品质均会受到不同程度的影响。

在检测肉品质方面，理化指标(如水分含量、色差、pH等)检测较为普遍。挥发性盐基氮TVB-N作为反映肉品新鲜程度的一项重要指标，在贮藏过程中由于酶和细菌的作用，蛋白质分解而产生氨及胺类等碱性含氮物质，使肉品质下降。分子生物学技术日新月异，大规模现代化新设备、新技术和新方法等在食品科学研究领域中发挥着越来越重要的作用。许多过去不能解释或仅限于表观描述的有关牛肉品质的研究也正在向分子水平过渡。在分子生物学方面，DNA质量检测、荧光定量PCR及PCR扩增在肉品掺假方面研究较多，但在针对检测肉品新鲜程度方面鲜有相关报道。随着贮藏时间的延长，肉类理化指标的变化规律研究报道较多，但没有将理化指标尤其是新鲜度指标与DNA质量建立相关关系的研究。

发明内容

针对现有技术中的缺陷和不足，本发明的目的在于提供一种采用DNA及PCR技术鉴定新鲜牛肉贮藏时间的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案由下述步骤组成：

1、分离提取贮藏的牛肉样品中牛DNA，并对DNA含量进行检测。

2、以提取的牛DNA为模板，对牛线粒体基因12S rRNA和内参基因β-globin2的引物分别进行荧光定量PCR扩增，获得牛线粒体基因与内参基因扩增产物的ct值，计算Δct值，Δct值的计算公式为：Δct＝∣ct_{牛线粒体基因}-ct_内参基因∣。