[发明专利]用于治疗勃起功能障碍的脐带间充质干细胞及其外泌体的联合制剂和其制备方法与给药方法

权利要求书

1.一种用于治疗勃起功能障碍的脐带间充质干细胞及其外泌体的联合制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2-P8的人源脐带间充质干细胞，按照3-5*10⁴/cm²的初始密度接种于细胞培养瓶或细胞培养皿中，培养基为基础培养基中含有体积比浓度5-15％的胎牛血清的培养体系；

(2)接种培养2-4天后，细胞融合率达到80-95％，细胞生长状态良好，吸弃全部培养上清，并以医用复方电解质注射液清洗细胞2-4次，然后加入复方电解质溶液，使溶液高度达到2-3mm，放入二氧化碳培养箱中饥饿培养；

(3)饥饿培养18-30h后，回收全部培养上清，以0.22um孔径滤膜过滤，过滤后的培养上清在3000-5000g的离心力条件下离心10-20min，再次回收离心上清；

(4)在200000-500000g的离心力条件下对回收的上清离心30-60min，离心后轻轻取出离心管，以移液管吸弃上部70％-90％体积的液体，将下部10％-30％体积的液体及沉淀混合均匀后作为制备ED治疗制剂的外泌体溶剂，在2-8℃条件下保存；

(5)人脐带间充质干细胞的培养：选取生长状态良好的，微生物检测均为阴性的，P2-P8的人源脐带间充质干细胞，按照3-5*10⁴/cm²的初始密度接种于细胞培养瓶或细胞培养皿中，培养基为基础培养基中含有体积比浓度5-15％的胎牛血清的培养体系；

(6)接种培养2-4天后，细胞融合率达到80-95％，细胞生长状态良好，回收全部细胞，并以复方电解质溶液清洗细胞3-4次，将最终获得的细胞按照0.5-2*10⁶/ml的浓度重悬于已经复温至18-24℃的步骤(4)得到的外泌体溶剂中，制备成联合制剂。

2.如权利要求1所述制备方法得到的用于治疗勃起功能障碍的脐带间充质干细胞及其外泌体的联合制剂。

3.如权利要求2所述用于治疗勃起功能障碍的脐带间充质干细胞及其外泌体的联合制剂，通过静脉输注或微针倒入的给药方法。