[发明专利]基于石墨烯的QuEChERS法建立脂溶性贝类毒素的UPLC-MS/MS检测方法

权利要求书

1.基于石墨烯的QuEChERS法建立脂溶性贝类毒素的UPLC-MS/MS检测方法，其特征在于，所述检测方法为通过QuEChERS法提取贝类样品，通过低温冷冻技术辅助QuEChERS法对样品进行净化，然后通过进UPLC-MS/MS分析；

所述检测方法的具体步骤为：

1)QuEChERS法前处理步骤：准确称取1g±0.01g均质好的贝类样品于15mL离心管中，加入2mL提取液，提取液为体积比为7：2：1的甲醇、乙醇与异丙醇；涡旋震荡30s；加入0.50g无水硫酸镁，涡旋震荡1min，2.3×10³g离心5min，转移上清液于另一15mL离心管中；按照上述步骤重复提取一次；合并两次上清液置于冰箱中-20℃冷冻2h；取出后迅速过装有脱脂棉的漏斗，将得到的滤液40℃下氮吹至近干，加入1mL提取液复溶；然后加入50.0mg氧化石墨烯和100.0mg无水硫酸镁，涡旋震荡5min，1.0×10⁴g离心5min，上清液经0.22μm尼龙滤膜过滤后，进UPLC-MS/MS分析；

UPLC-MS/MS色谱条件为：色谱柱：Waters XBridge C18色谱柱100mm×2.1mm，5.0μm；柱温：40℃；进样量：10μL；流动相：A：0.15％氨水；B：甲醇；流速：0.3mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；梯度洗脱程序为：

质谱条件为：流动相选择流动相A：0.15％氨水和流动相B：甲醇，9种毒素优化后的质谱参数为：离子源：ESI电喷雾离子源，正负离子同时扫描；检测方式：MRM多反应监测；毛细管电压：ESI⁺：3.5kv；ESI^-：3.0kv；离子源温度：145℃；脱溶剂温度：450℃；喷雾电压：4000V；锥孔气流量：50L/h；脱溶剂气流量：750L/h；9种脂溶性贝类毒素的质谱多反应监测条件为：

2)标准溶液的配制：根据每个毒素标准品的溶解度和性质，用移液器吸取适量的毒素标准品单标，用甲醇定容，使得h-YTX、YTX的浓度为400ng/mL，OA、DTX1、DTX2、SPX的浓度为200ng/mL；AZA1、AZA2、AZA3的浓度为50ng/mL的标准工作溶液，-20℃条件下冷冻保存。