[发明专利]一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒

权利要求书

1.一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒，包括PCR扩增试剂和对照试剂，其特征在于：所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和各种病原体引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成。

2.根据权利要求1所述的一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应缓冲液A的成分为5*Buffer，2.5mM dNTPs，所述的酶系B主要由HotStartHi Taq DNA聚合酶、M-MLV反转录酶和RNA酶抑制剂构成，所述的12种呼吸道发热病原体检测引物探针包含甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、甲型流感病毒H1N1(2009)、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、人副流感1型、人副流感2型和人副流感3型检测引物探针。

3.根据权利要求1所述的一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的5*Buffer的组分为50mM Tris-HCl、75mM KCl、17.5mM MgCl2。

4.根据权利要求1所述的一种呼吸道发热病原体多联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的12种呼吸道发热病原体的探针和引物的具体序列和序号如下：

甲型流感病毒上游引物F：GATGAGCCTTCTAACCGAGG SEQ ID NO.1；

甲型流感病毒下游引物R：ATCTTCAAGTCTCTGCGCG SEQ ID NO.2；

甲型流感病毒探针P：5’-荧光报告基团-AGGCCCCCTCAAAGCCGAGAT-荧光淬基团-3’SEQID NO.3；

甲型流感病毒H1N1上游引物F：CACAATAGGAGAGTGTCCAAA SEQ ID NO.4；

甲型流感病毒H1N1下游引物R：GAAACCGGCAATGGCTCC SEQ ID NO.5；

甲型流感病毒H1N1探针P：5’-荧光报告基团-ACAGGACTAAGGAACACCCCATCCATTC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.6；

甲型流感病毒H3N2上游引物F：TGTTGAACGAAGCAAAGCCTAC SEQ ID NO.7；

甲型流感病毒H3N2下游引物R：CGGATGAGGCAACTAGTGACC SEQ ID NO.8；

甲型流感病毒H3N2探针P：5’-荧光报告基团-CTGTTACCCTTATGATGTGCCGGATTATGC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.9；

甲型流感病毒H1N1(2009)上游引物F：TTGAGCTCAGTGTCATCATTTGA SEQ ID NO.10；

甲型流感病毒H1N1(2009)下游引物R：GAGGACATGCTGCCGTTACA SEQ ID NO.11；

甲型流感病毒H1N1(2009)探针P：5’-荧光报告基团-CCTAGTTCAGACAATGGAACGTGTTACC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.12；

乙型流感病毒上游引物F：ACAGTGGAGGATGAAGAAGAT SEQ ID NO.13；

乙型流感病毒下游引物R：TCGAATTGGCTTTGRATGTCCT SEQ ID NO.14；

乙型流感病毒探针P：5’-荧光报告基团-CACTCTTCGAGCGTCTTAATGAAGGAC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.15；

呼吸道合胞病毒上游引物F：TTAGCAAAGTCAAGYTGAATGATACA SEQ ID NO.16；

呼吸道合胞病毒下游引物R：CATAATTAGGAGTGTCAATRCTGTCTC SEQ ID NO.17；呼吸道合胞病毒探针P：5’-荧光报告基团-CTRCTGTCATCCAGCAAATACACYATTCAACG-荧光淬基团-3’SEQID NO.18；

呼吸道腺病毒上游引物F：AGGATGCTTCGGAGTACCT SEQ ID NO.19；

呼吸道腺病毒下游引物R：TGTTCCCCAKACTGAAGTAGGTG SEQ ID NO.20；

呼吸道腺病毒探针P：5’-荧光报告基团-CCGGGTCTGGTGCAGTTYGCC-荧光淬基团-3’SEQID NO.21；

肺炎支原体上游引物F：GCCCTCCCGTTTGAAGCGTACT SEQ ID NO.22；

肺炎支原体下游引物R：ACCCTAAAGACACCTATACT SEQ ID NO.23；

肺炎支原体探针P：5’-荧光报告基团-CCATTGCCACCAAACACCAAAAGC-荧光淬基团-3’SEQID NO.24；

肺炎衣原体上游引物F：TCTCTGTAAACAAACCCAAGGGC SEQ ID NO.25；

肺炎衣原体下游引物R：AGACTTTGTTCCAGYAGCTGTTGCT SEQ ID NO.26；

肺炎衣原体基因探针P：5’-荧光报告基团-TCCCCTTGCCAACAGACGCTGGCG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.27；

人副流感1型上游引物F：AGTGCTCTGGAGGAAGAACTAGGTG SEQ ID NO.28；

人副流感1型下游引物R：CCCTATCAGCRGTGTCCTC SEQ ID NO.29；

人副流感1型探针P：5’-荧光报告基团-CCCACAGGTGGTGGAGCCATAGAAG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.30；

人副流感2型上游引物F：ATACAACAGGGCAATGGGCCASEQ ID NO.31；

人副流感2型下游引物R：GCGACCACCATATACAGGAAATAA SEQ ID NO.32；

人副流感2型探针P：5’-荧光报告基团-TCCTGCAGTTGGAAGCGGGATCTATCACC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.33；

人副流感3型上游引物F：TTCATCTGTATCCTCAGAGATCCC SEQ ID NO.34；

人副流感3型下游引物R：CCACTCCCATTGCATAACTCC SEQ ID NO.35；

人副流感3型探针P：5’-荧光报告基团-ATAGTTGCCTGGTGCGAACTCACCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.36；

作为优选，所述的荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5荧光报告基团，所述的淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA荧光淬灭基团。