[发明专利]TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法

说明书

本发明属于含有机有效成分的医药配制品技术领域，公开了一种TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法，采用实时荧光定量聚合酶链反应和Westernblot检测TRIM31在人胰腺导管腺癌细胞系以及正常人胰腺上皮细胞系中的表达量，并选取两株胰腺导管腺癌细胞系进行后续实验。在胰腺导管腺癌细胞中转染靶向沉默TRIM31的siRNA，qRT‑RCR和Western blot实验检测对TRIM31的沉默效果；体外采用CCK‑8实验，平板克隆实验检测TRIM31对胰腺导管腺癌细胞增殖能力的影响。沉默TRIM31的表达可能通过抑制mTOR的活性抑制胰腺导管腺癌细胞的增殖，有望成为胰腺导管腺癌治疗的新靶点。

技术领域

本发明属于含有机有效成分的医药配制品技术领域，尤其涉及一种TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：胰腺导管腺癌是一种高度恶性的消化道肿瘤，近年来在全球的发病率呈逐年上升趋势，而死亡率一直居高不下，5年生存率仅为3％-6％。胰腺导管腺癌预后差，归因于临床症状出现较晚，大多数患者一经诊断即失去手术机会，而胰腺导管腺癌患者能够获得较长生存率的唯一的机会便是能够进行根治性手术切除。因此早期精确的诊断以及新型的治疗手段对胰腺导管腺癌的诊治尤其重要。三结构域蛋白(TRIM)家族是细胞生物学功能的关键调节因子，TRIM家族成员含有多域的E3泛素连接酶，并以N端存在三结构域为特征。研究表明TRIM家族在细胞生长、免疫、抗病毒等方面的功能显著。目前，TRIM蛋白家族成员TRIM 3、TRIM 25和TRIM 37等在恶性肿瘤中的作用也逐渐被证实。由于TRIM家族成员数目较多，其各自成员生物学功能不尽相同，所以有关近些年才确定的家族新成员TRIM31的研究较少，其在胰腺导管腺癌中的作用尚未见报道。如何设计靶向于TRIM31的干扰序列并选择适当的增殖检测模型成为研究TRIM31对胰腺导管腺癌细胞增殖作用的难点。同时，若上述问题得到解决，将有利于寻找胰腺导管腺癌治疗的新靶点，改善此肿瘤患者的预后。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)目前关于TRIM31的研究较少，其在肿瘤发生与进展中的作用尚不明确。

(2)其在胰腺导管腺癌中的作用尚未见报道。

(3)如何设计靶向于TRIM31的干扰序列以及选择适当的增殖检测模型。

解决上述技术问题的难度和意义：

由于TRIM家族成员众多，而且其成员各自作用存在差异。只有设计靶向于TRIM31的干扰序列并选择适当的增殖检测模型，才能明确TRIM31对胰腺导管腺癌的作用。若上述问题得到解决，将有利于寻找胰腺导管腺癌治疗的新靶点，改善此肿瘤患者的预后。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法。

本发明是这样实现的，一种检测癌症的基因序列，所述TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测TRIM31在人胰腺导管腺癌细胞系以及正常人胰腺上皮细胞系中的表达量，并选取两株胰腺导管腺癌细胞系进行后续实验。

进一步，所述TRIM31沉默对胰腺导管腺癌细胞增殖的检测方法包括以下步骤：

步骤一，细胞培养：正常胰腺导管上皮细胞HPDE、胰腺导管腺癌细胞AsPC-1、BxPC-3用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基，MIAPaCa-2及Panc-1用含10％胎牛血清的RPMIDMEM培养基，两组细胞均置于37℃、5％CO₂的恒温培养箱中培养；