[发明专利]RPL13A作为内参基因在RT-qPCR检测进入高原前后血液中基因表达中的应用

说明书

本发明提供了RPL13A作为内参基因在RT‑qPCR检测进入高原前后血液中基因表达中的应用，属于RT‑qPCR检测技术领域。本发明提供了RPL13A作为内参基因在RT‑PCR检测进入高原前后血液中基因表达中的应用；所述基因为低氧相关通路相关的基因。通过实时荧光定量PCR方法扩增RPL13A，得到扩增效率和Ct值，根据Ct值计算得到稳定度的平均值M，分析稳定度的平均值M和扩增效率发现，RPL13A在进入高原前后血液中稳定表达，说明以RPL13A作为参照基因定量检测进入高原前后人血液中不同目的基因的转录表达水平，能有效提高定量检测目的基因的精确度。

技术领域

本发明属于RT-qPCR检测技术领域，具体涉及RPL13A作为内参基因在RT-qPCR检测进入高原前后基因表达中的应用。

背景技术

低压低氧是高原环境的特征之一。在低氧条件下，机体可通过低氧相关通路诱导多种基因的表达，包括EPAS1和EGLN1。越来越多的研究表明缺氧诱导因子通路在低氧适应中起到重要作用，其中编码缺氧诱导因子HIF-2α的EPAS1可通过进一步调控多种基因的表达而使机体适应高原低氧环境。

为了检测高原低氧适应过程中的分子机制，不可避免地要对其所涉及的基因表达进行定量检测。实时定量PCR(quantitative real-time PCR，RT-qPCR)就是一种在转录水平对mRNA进行定量的方法，具有快速、重复性好和高灵敏等优点。因此，RT-qPCR在基因表达的定量研究中获得广泛应用。然而，为了获得RT-qPCR分析检测的最佳结果，依据实时荧光定量PCR国际化标准(MIQE)要求，提出了RT-qPCR实验的最少需求，其中包括合适的内参基因。

为了降低实验中的差异，通常在研究中会选择管家基因作为内参基因对目的基因进行校正和标准化，以校正转录效率和cDNA用量，弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别，从而避免mRNA转录效率、样品操作及下游处理步骤造成的误差。在分析中选用一种合适的稳定表达的内参基因对目的基因的表达量进行校正可以提高该方法的灵敏度和重复性。然而研究表明，机体在不同的环境条件下，多种可作为内参基因的管家基因表达也会随所处环境或处理条件不同而不稳定，造成不能准确检测目的基因表达。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供RPL13A作为内参基因在RT-PCR检测进入高原前后血液中基因表达中的应用，能够准备检测目的基因表达。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了RPL13A作为内参基因在RT-PCR检测进入高原前后血液中基因表达中的应用；所述基因为低氧相关通路相关的基因。

优选的，所述RPL13A具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

优选的，所述RPL13A的扩增引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；所述反向引物具有如序列表中SEQ ID No.3所示的核苷酸序列。

优选的，所述血液包括白细胞层。

优选的，所述高原的海拔高度为3500～4500米。

优选的，所述进入高原前所处区域的海拔高度为70～500米。

优选的，进入高原后的时间为2～4d。

优选的，所述低氧相关通路相关的基因包括EPAS1或EGLN1。

优选的，所述RT-PCR检测的扩增程序为95℃，2min；95℃、5s，退火57℃、20s，延伸72℃，20s，共40个循环；72℃，10min。

本发明提供了一种检测进入高原前后血液中基因表达的试剂盒，包括所述应用中的引物。