[发明专利]一种香菇遗传转化的方法

权利要求书

1.一种香菇遗传转化的方法，其特征在于，其包括：电击转化步骤；

所述电击转化步骤包括：将不完全酶解的香菇菌丝碎片与带有目的基因的质粒混合在电击条件下进行电击转化。

2.根据权利要求1所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，电击转化的条件为：电压：1800-2200kV/cm，电容：20-30μF，电阻：380-420Ω。

3.根据权利要求2所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，将不完全酶解的香菇菌丝碎片与质粒混合于电击缓冲液中进行电击转化，所述电击缓冲液含有：0.55-0.65M甘露醇和9-11mM磷酸钠，pH6.8-7.2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在电击转化步骤之前，所述方法还包括菌丝碎片制备步骤；

所述菌丝碎片制备步骤包括：将香菇湿菌丝与溶壁酶酶液混合，于28-30℃条件下酶解1.5-2.5h，离心收集沉淀，即得不完全酶解的香菇菌丝碎片。

5.根据权利要求4所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，将香菇湿菌丝与溶壁酶酶液混合是指：按每280-320mg的香菇湿菌丝对应0.8-1.2ml溶壁酶酶液的比例进行混合；其中，溶壁酶酶液中含有1.8％-2.2％的溶壁酶。

6.根据权利要求3所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在菌丝碎片制备步骤之前，所述方法还包括：湿菌丝制备步骤；

所述湿菌丝制备步骤包括：

步骤(a)：将香菇菌种接种至PDA平板上，待长满菌丝后，粉碎后，接种于PDB液体培养基中培养，得到培养物；

步骤(b)：将培养物粉碎后，接种于PDB液体培养基中培养，培养结束后，过滤收集菌丝，用甘露醇溶液洗涤，离心，收集沉淀，即得湿菌丝。

7.根据权利要求6所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在步骤(a)中，在PDB液体培养基中培养时的培养条件为：温度24-26℃，静置培养4-6d。

8.根据权利要求6所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在步骤(b)中，在PDB液体培养基中培养时的培养条件为：温度24-26℃，静置培养3-5d，培养期间间或摇匀培养基。

9.根据权利要求6所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所用甘露醇溶液浓度为0.55-0.65M，离心条件为：转速5500-6500rpm、离心时间：9-11min。

10.根据权利要求1-3任一项所述的香菇遗传转化的方法，其特征在于，在电击转化步骤之后，所述方法还包括：筛选步骤；

所述筛选步骤包括：

将经电击转化后的菌丝与第一筛选培养基混合，再将第一筛选培养基转入处于凝固状体的第二筛选培养基上，进行再生培养；

将再生转化子转接到第三筛选培养基上进行复筛；

其中，第一筛选培养基、第二筛选培养基和第三筛选培养基中均含有与质粒上的筛选标记基因相对应的筛选标记底物。