[发明专利]诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用

说明书

本发明公开了一种诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用，属于生物医药技术领域，利用充间质干细胞诱导分化睾丸间质细胞，并利用睾丸间质细胞与一定比例的其他成分组成性功能恢复药物，将该性功能恢复药物制成注射液，以注射的方式注射到病灶区域，通过睾丸间质细胞分泌睾酮素来恢复体内的睾酮水平，有效恢复男性性功能。总之，本发明安全有效，实用性强，高效的诱导分化出睾丸间质细胞，并且本发明药物可以有效地恢复男性性功能等优点。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体是涉及一种诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)，是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，这种干细胞能够发育成硬骨、软骨、脂肪和其他类型的细胞。间充质干细胞可以接受移植，而它们会成长为何种类型的细胞取决于其被注入的部位。例如，被注入心脏的间充质干细胞能够形成健康的新组织等。1976年，Freidenstein首次发现在骨髓里存在一群不纯一的细胞群体，这种细胞在体外培养时贴壁生长，形态和成纤维细胞相似，呈克隆性增殖，并提出“骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的概念。后经过深入和广泛的研究，发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。人类对间充质干细胞的生物学特性、来源、诱导分化、前期临床应用等取得了长足的进展。例如，骨髓间充质干细胞通过诱导能产生具有合成性腺激素和肾上腺类型类固醇激素能力的细胞，但骨髓间充质干细胞体外增殖能力、多向分化能力以及细胞稳定性都会随着骨髓供体的年龄增长或疾病的影响逐渐不同程度的减弱甚至丧失；并且，骨髓间充质干细胞的分化效率较低，分泌的性腺激素量较低，需要寻找其他来源的干细胞和有效的诱导分化方法，可以更高效地将干细胞诱导分化为睾丸间质细胞。

随着人均寿命的延长，人口老龄化问题越来越严重，中老年男性雄激素部分缺乏症患者越来越多。目前临床上主要采用了外源性雄激素替代疗法，目的是维持血清中睾酮的生理浓度，以替代内源性睾酮的生理功能。然而长期服用雄激素副作用较大，其一，体内雄激素的靶细胞较多，长期服用外源雄激素治疗容易会有毒副作用的发生，尤其是前列腺；其二，不同个体间血清睾酮水平差异较大，病人需频繁抽血检查相关指标以调整用量；其三，睾酮替代治疗会破坏人体雄激素分泌晨高夜低的自然节律，还会抑制自身睾丸的雄激素分泌和生精功能。因此，现需要一种方法来优化诱导分化睾丸间质细胞和解决男性性功能恢复的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种诱导分化睾丸间质细胞的方法及其在性功能恢复中的应用，利用充间质干细胞诱导分化睾丸间质细胞，并采用睾丸间质细胞为主制备恢复男性性功能的药物，治疗效果良好。

本发明的技术方案是:一种诱导分化睾丸间质细胞的方法，包括以下步骤:

(1)间充质干细胞的培养:将间充质干细胞单体按4-6×10⁵/ml接种于干细胞培养液中，并置于38℃的培养箱内，以1℃/天的速度降至36℃，后一直恒温保持在36℃，之后每2-3天换液传代一次，收获4-6代间充质干细胞，然后用体积比为2:1.5的0.3％胶原酶和0.25％胰蛋白酶先后加入进行消化25-40min，再通过振荡器震荡10-12min，得到培养扩增的间充质干细胞；其中干细胞培养液为DMEM和F12按体积比1.5:1混合后并加入3％FBS作为基础培养液，还含有55ng/ml EGF、15ng/ml bFGF、3％非必需氨基酸、0.3mM GABA、1.5％复合维生素，余量为超纯水，所述FBS所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少，避免有害成分过多影响细胞的扩增；所述EGF能够促进细胞的增殖分化；所述bFGF具有很强的促细胞分裂增殖活性，能促进细胞扩增；所述GABA能促进细胞生长。