[发明专利]一种沙门氏菌的检测方法及其应用

说明书

一种沙门氏菌的检测方法，包括如下步骤：步骤一，制备探针分子：根据沙门氏菌的基因组结构和保守序列，选取沙门氏菌的invA基因作为检测目标片段，根据GenBank:EU348365公开的沙门氏菌invA基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’‑GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT‑3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记；步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子混合，然后加入待测样品，检测荧光。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及食源性疾病的致病菌—沙门氏菌的检测，具体涉及一种沙门氏菌的检测方法及其应用。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)是一百多年前发现的一种病原体，其是一群形态和培养特性都类似的肠杆菌科的一个大属，其菌型繁多，分布广泛，是常见的重要的人畜共患病病原菌之一，也是引起人发生食物中毒最常见的病原菌，它不仅可以引起胃肠炎,还会引起伤寒、败血症及肠外灶性感染等多种症候群。据统计，在世界各国的细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首，在我国，以沙门氏菌引起的食物中毒也排在细菌性食物中毒的首位，沙门氏菌是监测食品卫生状况的重要指标菌，一旦发现食品污染沙门氏菌，表明监测的食品卫生不合格。食品及其原料中沙门氏菌的快速、现场检测对食品安全控制具有重要意义.。

目前，世界各国对食源性沙门氏菌的检测方法及限量标准均制定出了非常严格的规定，使受污染的食品能够得到及时处理，以保障食品质量及食品安全。然而，包括我国在内的许多国家对沙门氏菌的临床检测仍然采用传统的培养方法，这种常规的沙门氏菌检测存在操作繁琐、检测时间长、结果判定误差大等诸多弊端，已经远远不能满足现代快速检测诊断的需要。近年来，沙门氏菌检测技术有了很大的进展，由十分困难的传统分离培养法到免疫学检测方法发展成为今天的分子生物学检测技术，例如黄金海等人研究的环介导等温扩增技术(LAMP)对沙门氏菌进行检测（“食品中沙门氏菌LAMP快速检测方法的建立”，《天津大学学报》，2012年05期），钟伟军等人研究了食品中沙门氏菌PCR快速检测方法的建立（“食品中沙门氏菌PCR快速检测方法的建立”，《中国人兽共患病学报》，2007年第12期），然而以上分子检测方法均需要昂贵的设备，并且在结果判定方面不直观，需要借助一定的设备才能判断。

发明内容

基于现有沙门氏菌分子检测方法的不足，本发明旨在提供一种沙门氏菌的检测方法及其运用，该沙门氏菌的检测方法操作简单，灵敏度高，特异性高，特别适合基层食品安全的检测。

为实现本发明的目的，解决现有技术中存在的技术问题，本发明采用了如下技术方案：

一种沙门氏菌的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据沙门氏菌的基因组结构和保守序列，选取沙门氏菌的invA基因作为检测目标片段，根据GenBank: EU348365公开的沙门氏菌invA基因序列，设计探针分子，所述探针分子序列为5’-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT-3’，所述探针分子的5’端采用报告荧光基团进行标记，即探针分子结构为：报告荧光基团-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT混合，然后加入待测样品，检测荧光。

其中，步骤一中所述的报告荧光基团优选为异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)、四甲基罗丹明（TAMRA）、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red等。