[发明专利]一种环介导等温扩增结合基因芯片的检测方法在审
| 申请号： | 201810310190.5 | 申请日： | 2018-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN108588181A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 周勇;项周 | 申请（专利权）人： | 重庆高圣生物医药有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6837 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 400039 重庆市*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 环介导等温扩增 基因芯片 环介导等温扩增反应 杂交信号检测 可见光 大型仪器 光学放大 扩增产物 探针固定 现场检测 芯片表面 医院临床 杂交反应 检测 芯片 | ||
1.一种环介导等温扩增结合基因芯片的检测方法，其特征包括：
第一步，环介导等温扩增反应
配制环介导等温扩增体系如下：1. 4M betaine , 200 μM dNTPs , 1×IsothermalAmplification Buffer Ⅱ, FIP/BIP引物各1.6 μM, F3/B3引物各0.2μM，LF/LB引物各0.4Μ，50～150ng/μL的扩增模板1μL，总体系25μL，63℃水浴40min扩增，80℃水浴10min终止反应；
第二步，芯片制作
取1μL浓度为200ng/μL的探针点样到NC上，每组设两个平行点样点，紫外交联20min固定探针，使用杂交液封闭30min，真空干燥，4℃保存；
第三步，杂交显色
将环介导恒等温扩增产物 95℃加热 3 分钟，迅速置于冰上；取10μl PCR产物与2mL杂交缓冲液混合，与芯片一起放入杂交盒中，在常温下，于水平摇床上孵育60min；使用杂交缓冲液清洗2次，每次5min；清洗后，将亲和素（辣根过氧化物酶标记）加入到杂交盒中，孵育10min；用洗涤液清洗3次，每次5min；在晾干的基因芯片上点样ECL显色液，使用全自动化学发光图像分析系统显色。
2.根据权利要求1所述的环介导等温扩增结合基因芯片的检测方法，其特征在于所述的环介导恒等温扩增引物为：FIP、BIP引物，序列分别为：SEQ ID NO.1～2；F3、B3引物，序列分别为：SEQ ID NO.3～4；其中BIP引物的5’端带有生物素标记。
3.根据权利要求1所述的环介导等温扩增结合基因芯片的检测方法，其特征在于所述的探针为：杂交探针，序列为：SEQ ID NO.5；对照探针为：SEQ ID NO.6，其中所述的对照探针5’端带有生物素标记。
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