[发明专利]猪流行性腹泻病毒S蛋白及其亚单位疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种猪流行性腹泻病毒S蛋白，其特征在于，所述猪流行性腹泻病毒S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述猪流行性腹泻病毒S蛋白是由CHO细胞表达的含有高度糖基化的蛋白质，所述糖基化的蛋白质的分子量占所述猪流行性腹泻病毒S蛋白的33.3％。

2.一种编码如权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒S蛋白的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.一种猪流行性腹泻病毒S蛋白亚单位的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含如权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒S蛋白以及药学上可接受的ISA201VG佐剂，其中，所述猪流行性腹泻病毒S蛋白的浓度为30-200μg/头份。

4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗还含有免疫增强剂；所述免疫增强剂为Quil-A，所述Quil-A的浓度为300～500μg/头份。

5.一种制备如权利要求3-4任一所述疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)克隆OPTI-S，该OPTI-S的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，包括以下步骤：

1-1)对如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的PEDV-S进行密码子优化，得到OPTI-S；和

1-2)将OPTI-S克隆到真核表达载体中，得到重组质粒；

(2)所述猪流行性腹泻病毒S蛋白的表达和纯化；所述猪流行性腹泻病毒S蛋白的表达和纯化包括以下步骤：

2-1)将所述重组质粒转染至CHO细胞株中；

2-2)通过培养、筛选、驯化步骤2-1)中所述CHO细胞株得到高度表达的细胞株；和

2-3)发酵培养步骤2-2)中所述细胞株，从细胞上清中纯化得到重组猪流行性腹泻病毒S蛋白；

(3)将步骤(2)中制备的重组猪流行性腹泻病毒S蛋白制备成水相；

(4)将所述水相与作为油相的ISA201VG佐剂按照体积比46:54的比例乳化，得到疫苗。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述水相还包括免疫增强剂，所述免疫增强剂为Quil-A。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述真核表达载体为pEE12.4。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述CHO细胞为CHO-K1细胞。

9.一种根据权利要求1所述的重组猪流行性腹泻病毒S蛋白在制备猪流行性腹泻病毒S蛋白重组亚单位疫苗及相关诊断试剂中的应用。

10.一种根据权利要求3～4任一权利要求所述的猪流行性腹泻病毒S蛋白重组亚单位疫苗在制备用于预防猪流行性腹泻的药物中的应用。