[发明专利]一种水牛乳抗氧化肽及其分离制备方法

权利要求书

1.一种水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）水牛乳→脱脂→调节蛋白质质量分数→杀菌、恒温、调整pH值→添加风味蛋白酶进行酶解→灭酶→冷却酶解液→得到水牛乳酶解产物；

（2）采用凝胶过滤分离柱将水牛乳酶解产物中的物质用洗脱液进行洗脱分离，洗脱分离过程的检测波长为220nm，收集各洗脱组分；

（3）将步骤（2）的洗脱组分进行冷冻干燥；

（4）在步骤（3）的各组分中，筛选并收集基于还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力及超氧阴离子清除能力的综合抗氧化能力较高的组分，即为水牛乳抗氧化肽。

2.根据权利要求1所述水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，所述步骤（2）的洗脱液由洗脱液A和洗脱液B组成，所述的洗脱液A为含0.1%三氟乙酸的水溶液，所述的洗脱液B为含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液，所述洗脱液A和洗脱液B的体积比为7:3。

3.根据权利要求1所述水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，所述步骤（2）洗脱分离过程的检测波长还可为280nm或254nm。

4.根据权利要求1所述水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）凝胶过滤分离柱为superdex peptide 10/300 GL凝胶分离柱，将水牛乳酶解产物通过superdex peptide 10/300 GL凝胶分离柱，水牛乳酶解产物的进样量为500μL，样品含量为20mg/mL，洗脱液的洗脱流速为0.3~0.8mL/min。

5.根据权利要求1所述水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）收集各洗脱组分是利用蛋白纯化系统配套的全自动收集器，根据样品洗脱出峰体积，依次对不同组分样品进行分步收集。

6.根据权利要求1所述水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）冷冻干燥后，使用纯水复溶，得到水牛乳抗氧化肽水溶液。

7.一种水牛乳抗氧化肽，其特征在于，所述的水牛乳抗氧化肽由权利要求1-6任意一项所述分离制备方法制得。

8.根据权利要求7所述水牛乳抗氧化肽，其特征在于，所述的水牛乳抗氧化肽分子量在89.09-1245.32Da间。

9.根据权利要求7所述水牛乳抗氧化肽，其特征在于，所述的水牛乳抗氧化肽的洗脱出峰体积为18-20mL。

10.权利要求7所述的水牛乳抗氧化肽在制备具有抗氧化功效保健品或食品中的应用。