[发明专利]一种水牛乳抗氧化肽及其分离制备方法

说明书

本发明公开了一种水牛乳抗氧化肽及其分离制备方法，属于生物技术领域。其分离制备方法包括：水牛乳经脱脂、调节蛋白质质量分数、杀菌、恒温、调整pH值、添加风味蛋白酶进行酶解、灭酶、冷却酶解液后得到水牛乳酶解产物，再利用凝胶分离柱将水牛乳酶解产物进行分离，洗脱分离过程的检测波长为220nm、280nm以及254nm，收集各洗脱组分，冷冻干燥；其中还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力及超氧阴离子清除能力较高的组分，即为水牛乳抗氧化肽。本发明水牛乳抗氧化肽制备方法简单可行，活性肽组分的跟踪、富集效果好，产品活性高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种水牛乳抗氧化肽及其分离制备方法。

背景技术

乳蛋白不仅含有人体所必需的各种氨基酸，同时在胃肠道的消化过程中会产生各种具有生物活性的肽。生物活性肽的产生与酶切位点、蛋白种类和结构等因素显著相关。水牛乳蛋白质含量显著高于其他物种，是优质蛋白的重要来源。研究表明，水牛乳清蛋白以及乳脂球膜蛋白质组与牛属牛、山羊、马、骆驼、牦牛、人乳等存在显著差异，水牛乳酪蛋白本身也存在多态性，乳蛋白基因多态性会导致蛋白中的氨基酸序列发生变化，进而影响蛋白和肽的性质和功能。

目前已研究证实水牛乳蛋白经过风味酶直接酶解后具有一定的抗氧化活性，且酶解产物感官良好，可在含肽食品中进行添加利用，但对酶解产物并未进行进一步的分离，尚未得到活性集中的肽组分。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种抗氧化活性高、热稳定性好且经胃肠环境消化后仍能保持较高活性的水牛乳抗氧化肽。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种上述水牛乳抗氧化肽的制备方法，该方法将生物酶解技术与凝胶柱层析技术联合使用，科学合理、易于操作。

为实现本发明目的所使用的技术方法如下：

一种水牛乳抗氧化肽的分离制备方法，包括如下步骤：

（1）水牛乳→脱脂→调节蛋白质质量分数→杀菌、恒温、调整pH值→添加风味蛋白酶进行酶解→灭酶→冷却酶解液→得到水牛乳酶解产物；

（2）采用凝胶过滤分离柱将水牛乳酶解产物中的物质用洗脱液进行洗脱分离，洗脱分离过程的检测波长为220nm，收集各洗脱组分；

（3）将步骤（2）的洗脱组分进行冷冻干燥；

（4）在步骤（3）的各组分中，筛选并收集基于还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基清除能力及超氧阴离子清除能力的综合抗氧化能力较高的组分，即为水牛乳抗氧化肽。

优选的，所述步骤（2）的洗脱液由洗脱液A和洗脱液B组成，所述的洗脱液A为含0.1%三氟乙酸的水溶液，所述的洗脱液B为含0.1%三氟乙酸的乙腈溶液，所述洗脱液A和洗脱液B的体积比为7:3。

优选的，所述步骤（2）洗脱分离过程的检测波长还可为280nm或254nm。

优选的，所述的步骤（2）凝胶过滤分离柱为superdex peptide 10/300 GL凝胶分离柱，将水牛乳酶解产物通过superdex peptide 10/300 GL凝胶分离柱，水牛乳酶解产物的进样量为500μL，样品含量为20mg/mL，洗脱液的洗脱流速为0.3~0.8mL/min。

优选的，所述的步骤（2）收集各洗脱组分是利用蛋白纯化系统配套的全自动收集器，根据样品洗脱出峰体积，依次对不同组分样品进行分步收集，连续收集。

优选的，所述的步骤（3）冷冻干燥后，使用纯水复溶，得到水牛乳抗氧化肽水溶液。

本发明还提供一种水牛乳抗氧化肽，所述的水牛乳抗氧化肽由以上所述任意一项所述分离制备方法制得。