[发明专利]检测马铃薯M病毒用的引物、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了一种检测马铃薯M病毒用的引物、试剂盒及方法，其中引物包括PVM‑F3；PVM‑B3；PVM‑FIP；PVM‑BIP。本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种快速、简便、高效、准确性高、特异性强、灵敏性高，马铃薯X病毒RT‑LAMP检测用的引物；本发明另一个目的是提供一种包含上述引物的用于检测马铃薯M病毒的试剂盒；本发明另一个目的是提供一种采用上述马铃薯M病毒RT‑LAMP检测方法。

技术领域

本发明涉及一种马铃薯M病毒RT-LAMP鉴定用的引物、试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。

背景技术

马铃薯M病毒potato virus M,PVM发现于美国、法国、英国、德国、荷兰等国家,目前,PVM在世界各地均有发生[1]。PVM是香石竹潜隐病毒属Carlavirus成员。病毒粒体大小为650nmX12nm,有一个未完全封闭的病毒衣壳。致死温度为65-71℃,体外保毒期为5-7d,稀释限点为10²-10³。在寄主植物的任何部位都可检测到病毒,病毒主要存在于细胞质中。发现在感病植物细胞的细胞质中可出现呈无定形的X体状的内含体。该病毒基因组为单链正义RNA,长8535bp,其3'端有个Poly(A),5'端可能有一个甲基化的帽子结构,基因组RNA含有6个ORFs,编码6个蛋白。PVM的RNA的ORFI编码223kDa的复制酶；ORF2、ORF3和ORF4分别编码一个25kDa、12kDa和7kDa蛋自,组成了一个三基因盒,参与病毒的胞间运动；ORF5编码34kDa外壳蛋白；重叠的ORF6编码11-16kDa富含半胱氨酸的蛋白,该产物的功能还不清楚,但从结合核酸的能力看,可能有助于蚜虫传播或者涉及寄主基因转录及病毒RNA的复制[1]。

PVM的自然寄主主要是茄科植物，包括马铃薯、番茄及人参果等，在实验室中也可侵染觅色黎、昆诺黎、毛曼陀罗、千日红、菜豆、番茄、豇豆等。该病毒可通过机械传播、嫁接传播也可通过节肢动物如蚜虫的非持久性方式传播,但不能通过种子和花粉传播。侵染寄主后引起的典型症状为小叶皱缩扭曲斑驳和矮化。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种快速、简便、高效、准确性高、特异性强、灵敏性高，马铃薯M病毒RT-LAMP鉴定用的引物；

本发明另一个目的是提供一种包含上述引物的用于鉴定马铃薯M病毒的试剂盒；

本发明另一个目的是提供一种采用上述马铃薯M病毒RT-LAMP检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用以下方案：

一种马铃薯M病毒RT-LAMP鉴定用的引物，其特征在于包括：

PVM-F3:5’-TATGAGGACCGGTTCGCC-3’

PVM-B3:5’-GACCATTCATACCGCCAGTC-3’

PVM-FIP:5’-CGGGGTTGGTCGCCTTATCAG-TTACGTGGAGAACACTGCTG-3’

PVM-BIP:5’-AAGGACGTGGCTTTACGTGGT-ACCTCGGCATTAAGAGAGCT-3’。

一种马铃薯M病毒RT-LAMP鉴定用的试剂盒，其特征在于该试剂盒包括有：

如上所述的试剂盒，其特征在于所述的2×反应液缓冲液由以下组分组成：

如上所述的试剂盒，其特征在于所述的酶溶液为Bst DNA聚合酶和AMV逆转录酶混合液。

如上所述的任一种试剂盒，其特征在于荧光目视检测试剂中含有钙黄绿素荧光染料。