[发明专利]一种同型半胱氨酸荧光免疫层析检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种基于竞争法的同型半胱氨酸荧光免疫层析检测试剂盒及其使用方法。该试剂盒包括试剂I，试剂II和荧光免疫层析试纸条，试剂I含有二硫苏糖醇(DTT)、腺苷甲硫氨酸、同型半胱氨酸甲基转移酶、缓冲液、稳定剂；试剂II含有生物素化聚苯乙烯荧光微球、缓冲液、稳定剂；试纸条由样品垫、包被有生物素化抗体的结合垫、包含检测线和质控线的NC膜、吸水纸以及PVC胶板。利用竞争式荧光免疫层析法检测腺苷同型半胱氨酸来达到检测同型半胱氨酸的目的，该检测方法，操作简单，可同时检测大量样本，受干扰因素少，成本低廉。

技术领域

本发明涉及一种同型半胱氨酸荧光免疫层析检测试剂盒及其检测方法，属于快速体外诊断技术领域。

背景技术

同型半胱氨酸(Homocysteine，以下简称为Hcy)是甲硫氨酸代谢过程中的重要中间产物，在疾病条件下，酶的代谢出现障碍，血液中的Hcy浓度升高。1932年Du Vigneaud首次论及Hcy，1932年Carson和Neil在先天性智力障碍儿童中发现同型半胱氨酸尿症，并发现这些患者易患血栓栓塞性疾病，1969年McCully首次撰文提出了Hcy水平可能与动脉粥样硬化有关的观点，1976年Wilcken等人通过流行病学调查提出Hcy是心血管疾病的一个独立危险因素。90年代以来，有大量研究围绕Hcy与心血管疾病的关系展开，现在比较公认的观点是由Hcy的代谢异常导致的高同型半胱氨酸血症是心脑血管疾病及血管栓塞性疾病发病的独立危险因子，流行病学研究认为不存在所谓的Hcy的安全范围，当Hcy的血浆浓度大于6.3μmol/L时，就会迅速增加患心脏疾病的危险。Boushey等人对4000例血管疾病临床病人的分析发现，血浆总Hcy水平每升高5μmol/L，冠状动脉疾病的危险度增加1.6倍，脑血管疾病危险度增加1.8倍，外周血管疾病危险度增加6.8倍，其对心脑血管疾病危险性和胆固醇升高0.5mmol/L对心脑血管疾病的危险度相当。因此，测定血液中Hcy的浓度对监测病情尤其是早期血管炎症、观察治疗效果、进行临床研究、探讨发病机理具有重要意义。

Hcy作为一个小分子，其检测较为困难，对血液中Hcy的检测从八十年代逐步发展起来后，先后出现了多种检测方法，包括放射酶法、气相色谱、液相色谱法(HPLC)、氨基酸分析仪法、循环酶法和荧光偏振免疫法(FPIA)。应用最广泛的是HPLC法和FPIA，HPLC高效液相色谱法以液体为流动相，HPLC采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。FPIA测量Hcy是近年来使用最为广泛的方法之一，由Mohammed在1995年首次提出，该法中，首先加入还原剂二硫苏糖醇，同时加入腺苷，在S-腺苷-L同型半胱氨酸水解酶的作用下，将Hcy转化为SAH，然后，加入荧光标记的SAH和SAH单抗，使SAH和荧光标记的SAH与单抗竞争结合，最后测定免疫结合物的荧光偏振度，可测算出由Hcy转化产生的SAH的浓度。这两种方法具有较高的灵敏和精密度，但两者的成本相对较大。循环酶法是最近推出的较新的检测方法，于1961年由Lowry OH等人提出，最初用来检测6-磷酸葡萄糖。在循环酶反应中，两种工具酶循环利用底物，不断生成待测物，而底物保持稳态浓度，以足够低的浓度产生准一级反应，由此底物的稳态浓度和总体测定的速度线性相关，通过测量反应速度可即可确定底物的量。循环酶测定有时称为“扩增”测定，因为方法通常使分析物的测量敏感性增加100到1000倍。该方法操作简单、成本较低，但需要借助全自动生化分析仪等大型仪器，无法实现快速诊断。综上所述，发展简单、快速、低成本并且准确可靠的新型同型半光氨酸检测技术具有重要的意义，也是未来分级诊疗和心脑血管疾病早期筛查的迫切需求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：开发一种简单、快速、低成本的样本处理联合竞争法荧光免疫层析检测同型半光氨酸的试剂盒，以满足上述应用需求。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案是：