[发明专利]一种福建山樱花的不定芽再生方法

说明书

一种福建山樱花的不定芽再生方法，以福建山樱花成熟胚的子叶为外植体，通过诱导产生不定芽、不定芽的伸长培养及生根培养后，得到生根苗，再炼苗、驯化得到福建山樱花幼苗，建立了福建山樱花的一种再生方法，不定芽诱导率高达70％，成活率95％，操作步骤简便易行，解决了福建山樱花不定芽再生的困难问题，且诱导成活率高，极大缩短了植株再生的时间，将福建山樱花的再生周期缩短至60‑90天。本发明可用于遗传转化的体系建立，有助于进行福建山樱花基因改良，对于福建山樱花的组培快繁、基因工程育种及研究具有重要意义，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于植物再生领域，具体涉及一种福建山樱花的不定芽再生方法。

背景技术

福建山樱花(Cerasus campanulata)是蔷薇科(Rosaceae)樱属(Cerasus)落叶乔木，又名绯寒樱、钟花樱桃等，树高3-8米，树皮灰褐色或紫褐色，叶片卵形、卵状椭圆形或倒卵状椭圆形，叶片革质，长度4-7厘米，宽度2-3厘米。

福建山樱花每年冬末春初开花，先开花后展叶，花萼筒钟状，花瓣倒卵形长圆形，花瓣颜色桃红色、绯红色或暗红色。花呈下垂性展开，形如伞房花序状。盛花期为1月下旬到3月上旬，开花后结果为卵形或椭圆形核果，果实4月到6月成熟。

福建山樱花具有开花早、抗逆性强和适应性广等优点，是我国珍稀的野生种樱花，自然分布于浙江、福建、台湾、广东和广西等地。福建山樱花喜欢温暖和光照充足的环境，较耐高温和阴凉，在红壤或黄壤土中生长良好。随着国内乡土植物资源的开发利用，福建山樱花不仅应用在园林观赏上，而且具有生态和食用的价值，开发潜力巨大。

但是，福建山樱花野生资源较少，种子不易采收，难发芽，目前新品种选育工作滞后，开发工作处于萌芽状态，育成品种少，花色单调。为了提高福建山樱花的育种效率及应用分子育种，必须建立稳定高效的植株再生体系。目前，国内对福建山樱花组织培养的研究较多。

中国发明专利申请CN105359968A公开了一种福建山樱花的组织培养方法，利用腋芽作为外植体，将腋芽萌发出的嫩芽进行增殖培养；吕月良等(福建山樱花不定芽诱导和植株再生规模化繁殖试验，南京林业大学学报，2006年)用福建山樱花的春梢为外植体诱导丛生芽，也是对春梢的顶芽及腋芽进行诱导，然后进行增殖培养。

王光瓶等(福建山樱花的组织培养及植株再生，南京林业大学学报，2002年)，黄宇翔等(福建山樱花组培快繁研究，中国农学通报，2006年)以及李勇等(福建山樱花组培快繁技术，林业工程学报，2015年)在福建山樱花的组织培养中，都是用福建山樱花的嫩枝为外植体诱导丛生芽，其实是对腋芽进行诱导长出，然后增殖培养。

上述组培方法中，通过微体繁殖的组织培养方式，即诱导植株的顶芽或腋芽生长点直接诱导出丛生芽或者幼苗的方式获得无菌苗，此方式增殖系数较低，很难满足福建山樱花快速培育种苗生产的需求，最关键是应用这种组织培养方式进行福建山樱花的体外繁殖，并不属于植物再生体系的范畴，不能进行以后的遗传转化体系建立研究。

中国发明专利申请CN102217534A公开了一种福建山樱花体细胞胚胎发生方法，虽然属于植物再生范畴，但是，其培养方法难掌握，培养周期较长，再生率和成活率都很低，生产成本较高。

邹娜等(福建山樱花愈伤组织的诱导及植株再生，核农学报，2013)以福建山樱花茎段诱导出的腋芽的小叶为外植体，进行愈伤组织诱导及不定芽再生的研究，也属于植物再生范畴，但是，其要先将外植体茎段消毒后，接种于培养基，诱导腋芽萌发，取腋芽小叶接种诱导培养基进行愈伤组织的诱导，再将获得的愈伤组织转入分化培养基，将所得的丛生芽转入壮苗培养基，最后接入生根培养基培养，获得再生的完整植株，该方法整个再生过程复杂，需要5种培养基，耗时较长，至少需要160天以上。

发明内容