[发明专利]红细胞膜表面修饰基因递送系统及制备方法及应用

权利要求书

1.红细胞膜表面修饰基因递送系统的制备方法，其特征是包括如下步骤：

一.纳米红细胞膜液的制备：

(1)按比例，取375微升血液，加入EDTA，阻止其凝血，在600-1000g转速、4℃条件下离心5-10分钟，移除血浆和白细胞层，得到样品1；

所述EDTA和所述血液比例为1.5毫克/毫升；

(2)样品1用1×PBS缓冲溶液清洗至少5次，加入相当于所述血液体积8-20倍的0.25×PBS缓冲溶液，冰浴条件下，放置30-60分钟，使红细胞膜破裂并释放血红素，在4000-5000g转速下离心10-15分钟，收集浅粉色物为样品2；

(3)样品2用1×PBS清洗至少5次，离心，得到样品3，加入到8毫升pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，超声1-2小时，得到样品4；

(4)将样品4通过脂质体挤出器来回挤压过200-800纳米的聚碳酸酯薄膜，反复进行至少10次，收集红细胞膜囊泡液为样品5；

(5)将样品5超声1-2小时，得纳米红细胞膜液为样品6，备用；

二.基因复合物的制备：

(1)以DMSO为溶剂，配制浓度为2-5毫克/毫升的PLGA-PEI液为液体3，将液体3以10秒一滴的速度滴入搅拌的pH＝7.4的PBS缓冲溶液中，密封、静置5-10小时；液体3与pH＝7.4的PBS缓冲溶液的体积比为1：5-20；PLGA-PEI为P(LA-co-GA)-g-PEI的简称；

(2)将步骤(1)获得的液体移入截留分子量为1000-3500的透析袋中，用pH＝7.4的PBS缓冲溶液透析2-3天，得到基因载体液；

(3)pH＝7.4的PBS缓冲溶液配制的浓度为0.10毫克/毫升的基因溶液，在搅拌下，按PEI中的氮/基因中的磷的摩尔比＝20的比例，滴加到0.2毫克/毫升基因载体液中，搅拌1-2小时,得到基因复合物；

三.按体积比1-3:1的比例，将样品6滴加到基因复合物中,得到红细胞膜表面修饰基因递送系统。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述基因为pEGFP-ZNF580基因或Cy5标记的寡核苷酸。

3.权利要求1或2的制备方法制备的红细胞膜表面修饰基因递送系统。

4.权利要求3的红细胞膜表面修饰基因递送系统在制备基因递送药物的应用。