[发明专利]一种用于饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法

权利要求书

1.一种用于饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法，其特征在于，包括：

四倍体刺槐槐无菌试管苗的获得；试管苗增殖培养；试管苗的生根炼苗移栽；

具体步骤如下：

(1)外植体选择、处理

在4、5月份，选取生长健壮、具有典型性状的优良单株，剪取20～30cm嫩枝，用柔软的毛刷蘸取洗洁精溶液轻轻涮洗枝条表面的灰尘，洗净后，流水冲洗0.5小时，把枝条按嫩梢、中段、下端分成三个枝段，每个枝段至少带1个芽；

(2)外植体消毒

在超净工作台上，75％酒精浸泡上述三枝段30s～60s，无菌水冲洗外植体3遍，加入0.1％升汞溶液消毒，用无菌水冲洗4～6次,取出枝段，用灭菌滤纸吸干枝段表面的水分；

所述升汞消毒时间是嫩梢消毒6min，中段消毒8min，下端消毒10min；

(3)外植体接种

将带芽的枝段接入芽启动培养基上，诱导顶芽和腋芽萌发；每瓶接种3个枝段；所述启动培养基是指：MS、琼脂5.0g/L和蔗糖30g/L,pH值6.0；

(4)初代培养

将接种好的外植体放入培养室培养，经过10～15d的培养，枝段腋芽或顶芽开始萌动，茎尖明显伸长，基部产生少量愈伤组织，30～40d可长成2～4cm的新梢；

(5)试管苗增殖培养

将诱导出的新梢切成含1～2个腋芽的枝段或茎尖转接到试管苗增殖培养基上进行增殖培养，25～30d继代一次，接种；所述增殖培养基是指：MS、6-BA0.5mg/L、IBA 0.25mg/L、KT0.25mg/L、琼脂5.0g/L和蔗糖30g/L,pH值6.0；

(6)生根培养

将步骤(5)中增殖培养出的小苗切成单株转接到生根培养基上培养；

所述生根培养基是指：1/2MS+IBA 0.7mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂5.0g/L+蔗糖20g/L,pH值6.0，其中1/2MS指的是MS全量减半；

(7)炼苗移栽

步骤(6)中生根培养的小苗有小根发出，不超过1cm时进行炼苗移栽；移栽的混合育苗基质的成分以体积比计为：园土:锯末：有机肥:腐殖土＝50:20:10:20；

移栽时将距上口2cm处的混合育苗基质取出，用干净的河沙代替育苗基质装入；

(8)移入大田；

5月底之前炼苗，当年移栽入大田，或6月份以后炼苗，来年再移栽。

2.如权利要求1所述的工厂化育苗方法，其特征在于，步骤(3)中所述的带芽枝段的来源：将步骤(2)灭菌后的嫩梢下端剪去0.5cm，中段及下端的枝段两端用剪刀分别去除0.5cm，余下部分剪成含有1～2个腋芽的枝段。

3.如权利要求1所述的工厂化育苗方法，其特征在于，步骤(5)中所述的接种方法：继代1次或2次后，稍微用刀片清理小苗愈伤组织，直接转入新鲜的增殖培养基中，继代3次以后，苗高超过3cm的小苗切成单株，准备生根培养，苗高低于3cm的小苗连同愈伤组织一起，切成0.5cm大小带苗的愈伤块，转接到增殖培养基中继续增殖培养；以后的每次继代接种，按上述步骤重复操作，且每瓶接入材料数量要适中，分布均匀。

4.如权利要求1所述的工厂化育苗方法，其特征在于：各步骤中所述培养条件均为培养室温度白天25±2℃，夜晚18±2℃，光照强度1000～1500lx，光照时间16h/d。

5.如权利要求1所述的工厂化育苗方法，其特征是：步骤(7)中所述的炼苗移栽的具体步骤为：将试管苗封口膜绑绳松开，在培养室适应1～2d，转入遮光度50％的温室中，去掉封口膜，炼苗2～3d，待小苗叶片上的气孔自主开合后，用镊子轻轻将小苗夹出，清水洗去基部残留的培养基，移栽到装有混合育苗基质的营养钵中，保持相对湿度在80％以上。

6.权利要求1所述的工厂化育苗方法在饲料型四倍体刺槐育苗中的应用。