[发明专利]一种用于饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法

说明书

本发明公开了一种用于饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法，包括无菌试管苗的获得、试管苗增殖培养和试管苗的生根炼苗移栽技术。本发明提供了启动培养基、管苗增殖培养基和生根培养基，使试管苗月增殖系数可达到10～12，一个愈伤组织上丛生芽苗数量10～15，最高可达22，生根率达95％以上，在炼苗移栽时通过炼苗营养钵中河沙和混合育苗基质，使炼苗成活率达95％以上，移栽成活率达100％。所以，本发明解决了饲料型四倍体刺槐繁殖效率普遍偏低的问题以及成活率低的问题，且本发明技术操作简单，可使四倍体刺槐快速繁殖，达到迅速推广的目的。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，特别涉及一种饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法。

背景技术

饲料型四倍体刺槐(Tetraploidy Black Locust)是北京林业大学于1997年从韩国引入到我国的刺槐Robinia pseudoacacia优良无性系，是由人工诱导二倍体刺槐(2n)体细胞加倍(4n)而育成。其叶片宽大肥厚、蛋白质含量高、柔嫩多汁、适口性好，属优良饲料树种。山东省林业科学研究院依托承担的国家“863”项目、山东省农业良种产业化开发项目，以饲料型四倍体刺槐为材料，通过15年的系统选育，经过组培苗耐盐筛选、滨海盐碱地和内陆盐碱地不同地区种植，选育出两个耐盐抗旱四倍体刺槐新品种(鲁饲槐1号、品种权号20150151；鲁饲槐2号、品种权号20150152)，是国内首次成功培育的耐盐抗旱四倍体刺槐新品种。两个新品种均适宜于多种气候及土壤条件，可耐3‰～4‰的NaCl胁迫，鲁饲槐1号春季严重干旱条件下可维持较高生长量，鲁饲槐2号在夏季地面积水十多天的情况下，树体仅受到轻微影响，涝害后迅速恢复生长，表现很强的抗旱耐盐耐涝特性。

饲料型四倍体刺槐新品种培育成功之后，能否快速大批量繁殖该树种的苗木将决定该树种的推广栽培速度。姜金仲等研究表明:四倍体刺槐有大量的畸形败育花粉粒，种子大部分是败育的、萌发率平均只有5％。且有性繁殖不能保持新品种的优良性状，因此良种繁育采用无性繁殖。目前，良种繁育一般采用嫁接、扦插、组培等方法。四倍体刺槐用传统的硬枝扦插法成活率很低，大约只有3％，但使用改进的方法成活率最高达到40％左右。根插育苗和嫁接技术比较成熟，但是繁殖系数低，穗条浪费严重。鉴于上述原因，新品种采取组织培养方式进行工厂化育苗。四倍体刺槐引进中国以来，国内专家和学者在四倍体刺槐组织培养快繁技术研究领域取得了大量科研成果，利用组织培技术在四倍体刺槐外植体选择和消毒，微体快繁，嫩枝扦插等方面进行广泛研究。王玉珍等在大叶饲料型刺槐组培技术体系的研究中表明刺槐组培最佳分化培养基为L+6-BA0.8mg/L+KT0.25mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，生根培养基为1/2L+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，但其分化系数最高6.1；叶景丰等在四倍体刺槐组培瓶苗生根培养及生根苗移栽研究中指出：当NAA为0.2mg/L，IBA为0.5mg/L时生根率和平均有效根指数达到了最高，分别为85％和5.70；孟凡娟等研究表明：MS+NAA0.2 mg/L+6-BA 0.6mg/L为最适发芽培养基，而1/2MS+NAA0.2mg/L为最适生根培养基，生根率最高为54.55％。由上可知，在幼芽培养和不定根诱导过程中，外植体的选择及灭菌、培养条件和激素配比等方面不同实验室的结果之间有不同程度的差异，且这些研究在某一方面取得较大成果，仅限于实验室研究，作为饲料型四倍体刺槐新品种采取组织培养方式进行工厂化育苗体系来说是远远不够的。

发明内容

为了克服上述不足，本发明以四倍体刺槐(鲁饲槐1号、品种权号20150151；鲁饲槐2号、品种权号20150152)快速繁殖和进行工厂化育苗为目的提供一种用于饲料型四倍体刺槐的工厂化育苗方法，专利CN1582641A四倍体刺槐转基因及组培快繁方法，是发明人课题组成员10多年前针对四倍体刺槐品种基因转化进行组培研究，以诱导愈伤，建立再生体系进行基因转化为主进行培养，但是该方法操作复杂，增殖系数和生根率低，因此，发明人对其改进，与之相比，本申请步骤简单，外植体消毒启动后，仅有增殖和生根两种培养基，且增殖系数和生根率都提高很多。