[发明专利]一种用于检测肾癌中嫌色细胞癌亚型的基因检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测肾癌中嫌色细胞癌亚型的基因检测试剂盒，含有用于检测基因ENST00000571911在74bp～165bp位点完全甲基化的引物。嫌色细胞癌原发灶中ENST00000571911在74bp～165bp位点完全甲基化，而嫌色细胞癌癌旁正常组织和其他三种亚型的原发灶及癌旁正常组织均为非甲基化，因此可通过检测ENST00000571911在74bp～165bp位点是否完全甲基化诊断嫌色细胞癌亚型，特异性强，本实验45例样本的诊断准确率为100％。

技术领域

本发明属于基因诊断领域，涉及一种用于检测肾癌中嫌色细胞癌亚型的基因检测试剂盒。

背景技术

在临床中，肾细胞癌(remahcellcarcinoma，RCC)的发病率逐年升高，已成为一种高发、常见的肾实质恶性肿瘤。既往研究显示，该病多发于50～70岁年龄段人群，仅有约5％患者年龄为40岁以下，但近几年，青年RCC患者的人数逐年增多。RCC肿瘤包含多个亚型，且各亚型间在病理表征及预后均存在不同差异性，早期对它们进行准确的病理学分型，能够有效改善患者预后，提高抗癌治疗效果及患者存活率(参考文献：对比分析不同肾细胞癌亚型的临床病理学特征，热带医学杂志2016年11月第16卷第11期)。

但是，目前基本都是通过病理分析确定肾细胞癌的亚型，结果受临床医生的经验影响较大，往往需要2～3名经验丰富的临床医生才可确诊。

长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNAs)曾经被认为不具有任何生物学功能，被称为是基因组转录的“噪音”。然而，近年来研究发现这些“噪音”基因组可能发挥重要的生物学作用，并有研究证明，lncRNAs在各种疾病中都有异常表达，其中包括癌症。研究认为lncRNAs的表达能够通过DNA甲基化来调控，其启动子区CpG岛发生甲基化后，会抑制该基因的转录，如果抑癌基因启动子区CpG岛发生甲基化就很可能导致肿瘤的发生，并且不同位点的甲基化率不同，会对基因的沉默有一定的影响。

若能通过检测不同肾细胞癌亚型之间及与正常肾组织之间的lncRNA是否甲基化以及甲基化位置的差异就可以对肾细胞癌进行诊断并分型，必然有助于肾细胞癌的确诊。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种基因检测试剂盒确定不同肾细胞癌亚型的方法，这种方法不依赖于临床医生的经验，不受主观因素影响。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种诊断肾癌中透明细胞癌亚型的基因检测试剂盒

一种诊断肾癌中透明细胞癌亚型的基因检测试剂盒，含用于检测基因ENST00000567236在10bp～175bp位点完全甲基化的引物。

优选地，所述引物的上游序列如Sequence NO.1所示，下游序列如Sequence NO.2所示。

优选地，还含有PCR反应所需酶和试剂。

一种诊断肾癌中透明细胞癌亚型的方法，包括如下步骤：

步骤S1，取肾癌患者原发灶组织于液氮保存备检；

步骤S2，检测前取出原发灶组织，采用酚/氯仿抽提法提取组织中总DNA；

步骤S3，取2μg总DNA用2mol/LNaOH变性处理，于10mmol/L氢醌和3mol/L亚硫酸氢钠中50℃反应12～16h，处理后的DNA用WizardDNA纯化试剂进行纯化；

步骤S4，使用用于检测基因ENST00000567236在10bp～175bp位点完全甲基化的引物对纯化后的DNA进行PCR扩增，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳，用UV凝胶电泳成像及图像分析系统进行图像分析，若扩增出目的条带则判定为透明细胞癌亚型。