[发明专利]一种检测组蛋白乙酰转移酶的电化学发光法拉第笼免疫传感器

权利要求书

1.一种检测组蛋白乙酰转移酶的电化学发光法拉第笼免疫传感器，其特征在于该电化学发光法拉第笼免疫传感器通过以下方法构建的：

首先，制备捕获单元：合成磁性氧化石墨烯nanoFe₃O₄@GO，依次用EDC/NHS溶液、HCl处理，随后与捕获抗体-组蛋白乙酰转移酶第一抗体Ab₁结合，混合均匀，常温孵育，最后加入BSA封闭GO表面的非特异性结合位点获得捕获单元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO；

其次，制备信号单元：识别抗体-组蛋白乙酰转移酶第二抗体Ab₂连接DNA四面体中，合成四面体-Ab₂；再合成纳米金AuNPs，使之与氧化石墨烯形成复合物GO@AuNPs，随后与四面体-Ab₂结合，再加入Ru发光体，制得信号单元；

最后，制备法拉第笼免疫传感器：取Ab₁-nanoFe₃O₄@GO滴涂于MGCE表面，得Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，记为电极a；取p300溶液滴涂于Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，得p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，记为电极b；再取Ru-GO@AuNPs-四面体-Ab₂溶液滴涂于p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，得Ru-GO@AuNPs-四面体-Ab₂/p300/Ab₁-nanoFe₃O₄@GO/MGCE，记为电极c，即为电化学发光法拉第笼免疫传感器。

2.如权利要求1所述的电化学发光法拉第笼免疫传感器，其特征是，制备氧化石墨烯nanoFe₃O₄@GO的具体方法是：取20～60mg氧化石墨烯GO于20～60mL二次水中，超声15～45min后，加入25～75mL铁离子混合溶液，快速搅拌，将上述混合溶液温度升至75～95℃，在快速搅拌回流状态下，逐滴加入20～30％氨水至溶液pH为10，并反应30～60min，溶液颜色由棕色变为黑色，冷却至室温后，利用所得混合物的磁性，二次水反复清洗，直至上清液pH为中性，得到nanoFe₃O₄@GO溶液，用PBS定容至10～30mL，得浓度2mg/mL nanoFe₃O₄@GO的分散液；

其中，PBS浓度为0.1M，pH 7.4。

3.如权利要求1或2所述的电化学发光法拉第笼免疫传感器，其特征是，合成捕获单元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO的具体方法是：取25～75μL合成的nanoFe₃O₄@GO于200μL离心管中，加入25～75μL新制备的EDC/NHS溶液，混合均匀后，滴加0.1M HCl至上述溶液pH为5.0；常温孵育0.5～1.5h，使GO表面形成稳定的活性酯层；基于磁性，用水快速洗涤直至上清液为中性；然后加入25～75μL 0.5×10^-3～1.5×10^-3mg/mL组蛋白乙酰转移酶第一抗体Ab₁溶液，混合均匀，常温孵育2～6h；最后加入25～75μL 2wt％牛血清蛋白，孵育0.5～1.5h，目的是封闭GO表面的非特异性结合位点；利用磁性，水洗三次，即可获得捕获单元Ab₁-nanoFe₃O₄@GO；

其中，所述新制备的EDC/NHS溶液中EDC/NHS浓度分别为100μM/10μM。