[发明专利]一种检测鲤春病毒血症病毒的LAMP引物组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201810324810.0 | 申请日： | 2018-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN108384892A | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 薄清如;邵建宏;赵福振;冯家望;王小玉;沙才华;廖秀云;罗宝正 | 申请（专利权）人： | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 胡辉 |
| 地址： | 519000 广东省珠*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鲤春病毒血症 实时荧光 病毒 病原体检测 反应时间短 技术支持 检测试剂 快速检测 特异性强 稳定性强 灵敏度 试剂盒 种检测 检测 鉴别 应用 | ||
1.一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测的引物组，其特征在于，引物组的核苷酸序列如下所示：
鲤春病毒血症病毒外引物：
SVCV-F3：5'-GCAACCTGTAATTCAGCCA-3'，
SVCV-B3：5'-ACTGTTGTGACAGATGCC-3'；
鲤春病毒血症病毒内引物：
SVCV-FIP：5'-GCATGGCAGATCCATCCAGAAGGATTGAGTGCCACCAA-3'，
SVCV-BIP：5'-TTGTGATTACAGATGGTACGGACCGTTCCTGATGCAATCCTTGA-3'；
鲤春病毒血症病毒环引物：
SVCV-LF：5'-CTGTACTGAAGACAGATGGAGATT-3'，
SVCV-LB：5'-GTATTCATCCAATCAGTCCTACCA-3'。
2.一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有权利要求1所述的引物组。
3.一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)提取样本RNA；
2)以提取的RNA作为模板，使用权利要求1所述的引物SVCV-F3、SVCV-B3、SVCV-FIP、SVCV-BIP、SVCV-LF和SVCV-LB进行实时荧光LAMP扩增反应获得产物；
3)根据扩增曲线进行分析，确定样品中是否含有鲤春病毒血症病毒；
上述方法不用于疾病的诊断和治疗。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，实时荧光LAMP扩增反应体系为：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。
6.根权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的逆转录酶为AMV逆转录酶。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的封闭液为甘油。
8.据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)的实时荧光LAMP反应程序为：63℃反应30s；63℃反应15s，63℃反应45s，循环60次；并在63℃反应45s时收集FAM荧光通道的信号。
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