[发明专利]一种检测鲤春病毒血症病毒的LAMP引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明提供的一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP引物组、检测试剂盒及其检测方法，可以通过实时荧光和LAMP方法的结合，具有操作简便、特异性强、灵敏度高、稳定性强、鉴别简单的特点。依托于LAMP技术，本发明的反应时间短，为快速检测提供了技术支持，因此本发明满足检测要求，在病原体检测中有极高的应用价值。

技术领域

本发明属于水生动物病原体检测领域，关于一种鲤春病毒血症病毒(SVCV)的实时荧光LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。

背景技术

鲤春病毒血症(Spring viremia of carp,SVC，又称鲤鱼传染性腹水症)是由鲤弹状病毒引起的一种鲤鱼科急性、出血性的传染性疾病。以全身出血及腹水、发病急、死亡率高为特征。世界动物卫生组织将其列为需要申报的疫病之一。

传染源主要为病鱼、死鱼和带毒鱼，传播的途径为经水传播，病毒可经鳃和肠道入侵；也可能垂直传播，或由某些水生吸血寄生虫(例如鲺、尺蠖、鱼蛭等)机械传播。SVC主要感染1岁以上的鲤鱼、鲢、鳙、欧鲫和六须鲶等，还可使虹鳟、草鱼、狗鱼人工感染。病鱼和带毒鱼主要经粪排毒，其尿液、精液和鱼卵中也含有病毒。

本病在欧、亚两洲均有流行，是鱼类口岸检疫的第一类检疫对象。因此，制备一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒为目前所需。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP引物。

本发明的另一目的在于提供一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒。

本发明的再一目的在于提供一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测的引物组，引物组的核苷酸序列如下所示：

鲤春病毒血症病毒外引物：

SVCV-F3：5'-GCAACCTGTAATTCAGCCA-3'，

SVCV-B3：5'-ACTGTTGTGACAGATGCC-3'；

鲤春病毒血症病毒内引物：

SVCV-FIP：5'-GCATGGCAGATCCATCCAGAAGGATTGAGTGCCACCAA-3'，

SVCV-BIP：5'-TTGTGATTACAGATGGTACGGACCGTTCCTGATGCAATCCTTGA-3'；

鲤春病毒血症病毒环引物：

SVCV-LF：5'-CTGTACTGAAGACAGATGGAGATT-3'，

SVCV-LB：5'-GTATTCATCCAATCAGTCCTACCA-3'。

一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测试剂盒，该试剂盒中含有上述所述的引物组。

一种鲤春病毒血症病毒的实时荧光LAMP检测方法，包含以下步骤：

1)提取样本RNA；

2)以提取的RNA作为模板，使用上述所述的引物SVCV-F3、SVCV-B3、SVCV-FIP、SVCV-BIP、SVCV-LF和SVCV-LB进行实时荧光LAMP扩增反应获得产物；

3)根据扩增曲线进行分析，确定样品中是否含有鲤春病毒血症病毒；

上述方法不用于疾病的诊断和治疗。

进一步的，实时荧光LAMP扩增反应体系为：