[发明专利]一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)鸭传染性浆膜炎菌液的制备；

2)取步骤1)所述菌液制备免疫用灭活抗原；

3)取步骤2)所述的灭活抗原按照比例加入保护剂制成芯材；

4)包材的制备；

5)取步骤3)所得产物，采用步骤4)所述的包材进行微囊化包被并分散到冻干保护剂中冷冻干燥制成疫苗。

2.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤2)免疫用灭活抗原是以步骤1)所述的鸭传染性浆膜炎菌液为抗原制备的。

3.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤1)所述菌液的制备方法为：将冻干菌种用LB肉汤复溶后，挑取菌液在含2％-5％新生牛血清TSA平板上进行划线复苏，在37℃5％CO₂条件下或是在厌氧罐中培养20-24小时，挑取单菌落接种于TSA固体培养基上划线培养16-20小时制备一级种子，将一级种子接种添加2％～5％新生牛血清的LB液体培养中振荡培养10-14小时制备二级种子，并将二级种子按照2％-5％的接种比例接种添加1％～3％新生牛血清的LB液体培养基的发酵罐中发酵培养10-16小时收获菌液。

4.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤2)免疫用灭活抗原是将步骤1)制备的鸭传染性浆膜炎菌液经离心浓缩后，加甲醛灭活；其中离心浓缩的转速为5000～8000rpm，离心时间为15～30min，为5-10倍；灭活包括以下步骤：以1:200～1:500(w/w)的比例向浓缩后的鸭传染性浆膜炎菌液中加入甲醛溶液，于37℃灭活18～96h。

5.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤3)所述的保护剂成分包括蔗糖、脱脂乳、水解乳蛋白，海藻糖、甘氨酸、谷氨酸钠；各组分比例如下蔗糖0.5～1％，脱脂乳1～2％、水解乳蛋白0.1％～0.5％、海藻糖0.2％～10％、甘氨酸0.1％～0.5％、谷氨酸钠0.2％～0.5％。

6.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤3)所述的保护剂配制方法为将蔗糖、脱脂乳、水解乳蛋白成分按照比例分别溶解后，115℃高压灭菌20min；海藻糖、甘氨酸和谷氨酸钠组分按照比例分别溶解后经0.22μm的滤膜进行过滤除菌。

7.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤4)所述的包材选自海藻酸钠，壳聚糖、乙基纤维素、氯化钙；其中海藻酸钠的浓度为2％～3％，壳聚糖的浓度为0.1％～0.5％，氯化钙的浓度为2％～3％，乙基纤维素的浓度为5％～10％。

8.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤5)所述的疫苗制备方法为：将检验合格的灭活抗原使用通过离心重悬方式使用保护剂重悬，再与海藻酸钠搅拌混匀20分钟～40分钟制成乳浊液，采用喷雾的方法喷入氯化钙溶液中，形成海藻酸钙微胶囊，喷雾完毕后继续搅拌20分钟～30分钟；离心收集海藻酸钙微胶囊，然后将微胶囊分散到壳聚糖溶液中，充分搅拌20分钟～40分钟，离心收集海藻酸钙-壳聚糖微胶囊，去离子水洗涤3次，再将收集的微胶囊分散到冻干保护剂中，混匀后经冷冻干燥进行脱水后制成微胶囊。

9.根据权利要求1所述的一种鸭传染性浆膜炎微囊化口服疫苗的制备方法，其特征在于步骤5)所述的冻干保护剂成分包括海藻糖2％～10％，甘露醇5％～10％，山梨醇5％～10％、蔗糖5～10％、葡萄糖5％～10％当中的一种组分或多种组分。