[发明专利]一种肺炎支原体抗原检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种肺炎支原体抗原检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有检测卡和样本提取液瓶；所述检测卡包括卡盖、卡体和试纸条，所述试纸条依次设有样品垫层、胶体金层、硝酸纤维素膜和吸水层，其特征在于：所述样品垫层固相生物素标记抗肺炎支原体单克隆抗体A，所述胶体金层固相抗肺炎支原体单克隆抗体B；所述硝酸纤维素膜依次设有包被链霉亲和素的检测线和包被羊抗鼠IgG抗体的质控线；所述样本提取液瓶内的提取溶液由牛血清白蛋白、叠氮钠以及曲拉通X-100配制而成。

2.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体抗原检测试剂盒，其特征在于：每100mL提取溶液中含有0.5～1g/mL的牛血清白蛋白10～15mL和0.03～0.05g/mL的叠氮钠1～3mL。

3.一种如权利要求1或2所述肺炎支原体抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：

(1)样本提取液的配制

取0.5～1g/mL的牛血清白蛋白10～15mL和0.03～0.05g/mL的叠氮钠1～3mL，用0.3～0.5g/mL曲拉通X-100定容至100mL，得到样品提取液；

(2)胶体金的制备及标记

0.5～1g/mL氯金酸水溶液100mL，加热至沸腾，加入8～10g/mL柠檬酸三钠1.5mL，混匀，继续煮沸10～15分钟，调pH，搅拌下加入2～3mg抗肺炎支原体单克隆抗体B，继续搅拌10～15分钟，加入8～10g/mL NaCl，摇匀，以10000r/min离心10～15min获得的沉淀物即为胶体金标记抗体；

(3)生物素的标记

取1mg/mL N羟基丁二酰亚胺酯-二甲基亚砜溶液，加入1～2mL、1.2～1.5mg/mL抗肺炎支原体单克隆抗体A，室温下持续搅拌2～3h，在4℃条件下，用缓冲液充分透析后再加入叠氮钠及BSA，得到的生物素标记物置4℃，避光保存；

(4)胶体金和生物素标记物的固相化

4.1预处理：将玻璃纤维用含0.5～1g/L BSA的0.1mol且pH7.2～7.5的PBS缓冲液处理，晾干；

4.2固相化胶体金标记物：将玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后胶体金标记物30～40mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得到金标垫；

4.3固相化生物素标记物：将玻璃纤维放入不锈钢盘，量取复溶后生物素标记物30～40mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收，干燥，得到样品垫；

(5)包被硝酸纤维素膜

5.1包被链霉亲和素：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将链霉亲和素稀释至0.8～1.2mg/mL，喷于硝酸纤维素膜上，形成链霉亲和素检测线；

5.2包被羊抗鼠IgG抗体：用pH7.2～7.5的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，喷于上述步骤5.1制得的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；

5.3将上述步骤5.2制得的硝酸纤维素膜干燥1.5～2小时；

(6)试纸条的制备

在PVC板的中间位置粘贴上述步骤5.3制备的硝酸纤维素膜，在PVC板固定硝酸纤维素膜位置的上方粘贴吸水纸；在PVC板固定硝酸纤维素膜位置的下方，粘贴步骤(4)制备的金标垫及样品垫，压平整切成试纸条；

(7)检测卡安装

将步骤(6)切好的置于卡体内，将卡盖和卡体扣合，得到肺炎支原体抗原检测卡；将步骤(1)得到的样本提取液装入瓶内，与检测卡分别置于盒体内，得到肺炎支原体抗原检测试剂盒。

4.根据权利要求3所述肺炎支原体抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中用0.1～0.2mol/L的K₂CO₃或者Na₂CO₃调pH为7-8。

5.根据权利要求3所述肺炎支原体抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中用pH7.2～7.5磷酸盐缓冲液透析。

6.根据权利要求3所述肺炎支原体抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中叠氮钠的终浓度0.3-0.5g/L，BSA的终浓度为0.8-1.2g/L。