[发明专利]基于CRISPR-链取代的等温扩增及检测技术

权利要求书

1.一种基于CRISPR-链取代的等温扩增试剂盒，包括链取代等温扩增试剂，其特征在于：试剂盒还包括了野生型Cas9和/或核酸酶缺陷的Cas9切口酶、特异性识别目标DNA序列上下游的sgRNA对，链取代等温扩增反应的扩增引物对，该引物对与Cas9-sgRNA复合体对与目的基因结合后暴露出的单链区域互补。

2.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：核酸酶缺陷的Cas9切口酶为HNH核酸酶缺陷的Cas9切口酶。

3.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：sgRNA对的识别位点分别为目的序列上游CCN序列3’端的10～30个核苷酸序列和下游NGG序列5’端的10～30个核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：链取代等温扩增试剂的DNA引物具有如下特征：该引物5’端包含了一个切口酶识别位点，且该位点的酶切位点在其互补链上；该引物的中段与Cas-sgRNA复合体所识别的靶DNA区域的NGG序列所在链的至少10个连续核苷酸互补配对。

5.根据权利要求4所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：链取代等温扩增试剂的DNA引物的3’端包含了一段1～10个核苷酸的与NGG序列所在链核苷酸互补的序列。

6.根据权利要求1所述的等温扩增试剂盒，其特征在于：sgRNA对识别位点的间距100～1000bp，优选100～250bp，识别位点5’端以CCN为起点，3’端靶序列以NGG为终点。

7.一种基于CRISPR-链取代的核酸检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1～6任一项所述的等温扩增试剂盒，以及核酸定量分析试剂。

8.根据权利要求7所述的核酸检测试剂盒，其特征在于：核酸定量分析试剂选自特异性分子信标分子。

9.基于CRISPR-链取代的等温扩增方法，包括如下步骤：

1)获取待测样品核酸；

2)使用权利要求1～6任一项等温扩增试剂盒含有的试剂对待测核酸样品进行扩增。

10.基于CRISPR-链取代的等温扩增检测方法，包括如下步骤：

1)获取待测样品核酸；

2)使用权利要求1～6任一项等温扩增试剂盒含有的试剂对待测核酸样品进行扩增；

3)对扩增产物进行分析，确定检测结果。