[发明专利]一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒，包括以下组分：血液稀释液、单个核细胞分离液、细胞培养液、淋巴细胞活化液、死细胞去除染料、FcR阻断剂、荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体、荧光标记的抗人细胞内分子的抗体、脂多糖、洗涤缓冲液、细胞染色缓冲液、细胞固定液和透膜洗液；所述荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体由抗人CD3或CD4抗体，抗人CD8抗体，抗人CD25抗体，抗人CD127抗体，抗人ICOS抗体，抗人TGF-β抗体和抗人CCR6抗体组成；所述荧光标记的抗人细胞内分子的抗体由抗人IL-10抗体，抗人IL-17抗体和抗人Foxp3抗体组成；

所述死细胞去除染料、荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体荧光种类和荧光标记的抗人细胞内分子的抗体荧光种类包括：Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、AlexaFluor 647、Alexa Fluor 700、APC、APC/Cy7、APC/Cy7、APC/H7、Brilliant Violet 421、Brilliant Violet 510、Brilliant Blue 515、Brilliant Violet 570、BrilliantViolet605、BrilliantViolet 650、Brilliant Violet711、Brilliant Violet785、FITC、LEAF、Pacific Blue、PE、PE/Cy5、PE/Cy7、PE/Dazzle、PerCP或PerCP/Cy5.5；

所述荧光的种类根据流式细胞仪的激光和滤光片的配置进行自由组合；

所述FcR阻断剂的有效成分包括人免疫球蛋白或与使用的流式抗体同一种属且亚型相同的不相关的免疫球蛋白；

所述检测人调节性T细胞亚型的试剂盒用于检测的Treg细胞亚型包括：阳性表达CD4、CD25、Foxp3、IL-10和TGF-β的诱导型Treg细胞，阳性表达CD4、CD25、Foxp3且CD127低表达或阴性的Treg细胞，阳性表达CD4、CD25、Foxp3和ICOS的ICOS阳性Treg细胞，阳性表达CD4、CD25和IL-10且Foxp3阴性的产IL-10的1型Treg细胞，阳性表达CD8、CD25和Foxp3的CD8阳性Treg细胞，以及阳性表达CD4、Foxp3、CCR6和IL-17的产IL-17的Treg细胞。

2.根据权利要求1所述的检测人调节性T细胞亚型的试剂盒，其特征在于，所述血液稀释液选用渗透压与人体血浆渗透压相等的溶液，具体的所述血液稀释液包括NaCl溶液或PBS缓冲液，所述NaCl溶液的质量浓度为0.9％，所述PBS缓冲液包括以下重量份的组分：8.0份NaCl，0.20份KCl，1.16份Na₂HPO₄和0.20份KH₂PO₄，所述PBS缓冲液的pH值为7.0～7.6。

3.根据权利要求1所述的检测人调节性T细胞亚型的试剂盒，其特征在于，所述单个核细胞分离液的有效成分包括：聚蔗糖和泛影葡胺，或者泛影钠和多聚糖，或者碘克沙醇，所述单个核细胞分离液的溶剂为蒸馏水，所述单个核细胞分离液的密度是1.076～1.078g/mL，渗透压是275～305mOsm。

4.根据权利要求1所述的检测人调节性T细胞亚型的试剂盒，其特征在于，所述细胞培养液为培养人外周血单个核细胞的培养液，具体是以RPMI 1640培养基为基础，包含胎牛血清和青霉素-链霉素双抗溶液，所述胎牛血清的体积终浓度为0.1～20％，所述青霉素-链霉素双抗溶液的体积终浓度为0～3％。