[发明专利]一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及其检测方法，属于细胞亚型检测技术领域。本发明提供的试剂盒，包括以下组分：血液稀释液，单个核细胞分离液，细胞培养液，淋巴细胞活化液，死细胞去除染料，FcR阻断剂、荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体、荧光标记的抗人细胞内分子的抗体、PBS缓冲液、脂多糖、洗涤缓冲液、细胞染色缓冲液、细胞固定液和透膜洗液。检测时，首先分离全血中的单个核细胞，其次刺激人外周血单个核细胞，最后荧光抗体染色即可检测调节性T细胞亚型。利用本发明的试剂盒及检测方法可简单快捷的分辨2‑6种调节性T细胞亚型。

技术领域

本发明属于细胞亚型检测技术领域，具体涉及一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒及检测方法。

背景技术

19世纪90年代中期，人们提出CD4⁺抑制性T细胞，即调节性T(Treg) 细胞，可以抑制效应性T细胞如Th细胞对机体的免疫损伤效应。目前，越来越多的资料显示人体内有几种不同亚型的Treg，且其在免疫系统中的作用不同，使得Treg的作用更加复杂。

幼稚T细胞在不同条件可分化为多种调节性T(Treg)细胞，目前已鉴定出至少7种Treg细胞亚型：(1)nTregs：分泌IL-10和TGF-β的 CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺的T细胞，是数量最多的Treg细胞亚型；(2)iTregs：外来抗原可刺激外周血幼稚CD4⁺T细胞诱导其表达Foxp3，此外分泌TGF-β和IL-10的Th3细胞也属于该亚型；(3)CD127^low/-Treg：在新生儿胸腺发现了CD4⁺CD25⁺CD127^low/-Foxp3⁺Treg细胞；(4)ICOS⁺Treg：ICOS⁺Treg细胞表达IL-10、IL-17和干扰素(IFN)-γ；(5)Tr1细胞：Tr1细胞是不表达 Foxp3但分泌IL-10并可抑制效应性Th细胞功能CD4⁺T细胞；(6)CD8⁺Tregs： OT-1CD8细胞在IL-4和IL-12作用下可迅速分化为表达CD8、分泌IL-10 的Treg细胞(CD8⁺Treg细胞)，且共表达活化和幼稚细胞相关的标记物；(7) 产IL-17的Foxp3⁺Tregs。

鉴于Treg细胞有多种亚型，且其在机体中的作用不同，将其分辨开进行单独研究显得尤为重要。但是目前市售的Treg试剂盒仅将CD4⁺CD25⁺ Foxp3⁺T细胞定义为Treg细胞，并不包括CD8⁺Treg细胞和CD127^low/-Treg 细胞，也不能进一步鉴定CD4⁺Treg细胞中的其它Treg细胞亚型。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种可同时分辨2-6种人调节性T细胞亚型的试剂盒。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测人调节性T细胞亚型的试剂盒，包括以下组分：血液稀释液、单个核细胞分离液、细胞培养液、淋巴细胞活化液、死细胞去除染料、FcR阻断剂、荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体、荧光标记的抗人细胞内分子的抗体、脂多糖、洗涤缓冲液、细胞染色缓冲液、细胞固定液和透膜洗液；所述荧光标记的抗人细胞表面标记分子的抗体包括：抗人 CD3或CD4抗体，抗人CD8抗体，抗人CD25抗体，抗人CD127抗体，抗人ICOS抗体，抗人TGF-β抗体和抗人CCR6抗体；所述荧光标记的抗人细胞内分子的抗体包括：抗人IL-10抗体，抗人IL-17抗体和抗人Foxp3抗体。