[发明专利]一种ESCRT-III核心亚基Snf7类双链RNA及其制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种ESCRT‑III核心亚基Snf7类双链RNA，其转录模板的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

技术领域

本发明属于昆虫控制领域，具体涉及一种转运必需体分选复合物III核心亚基Snf7类的双链RNA(dsRNA)，以及该dsRNA的制备方法和应用。

背景技术

ESCRT-Ⅲ，称为转运必需体分选复合物Ⅲ(the endosomal sorting complexesrequired for transport-III)主要由Vps20、Snf7/Vps32、Vps24和Vps2四个“核心”亚基组成，是真核细胞中完成内体膜内陷以形成多囊泡体(MVB)的关键组分。ESCRT-Ⅲ的主要功能是募集去泛素化(de-ubiquitin)的酶，促进被泛素(ubiquitin)标记的膜蛋白的降解。除了参与MVB的形成外，ESCRT-III还与细胞跨膜蛋白的内化、转运、分选、细胞自噬和细胞分裂等细胞生命活动有关，而这些生命过程又与MVB形成过程密切相关(Babst等，2002；Res等，2007；Capalbo等，2012；Tang等，2015)。因此，ESCRT-III对于所有真核生物的生长发育均有重要的作用。

Snf7属于进化保守的蛋白质家族，在酵母中是由240个氨基酸组成，在果蝇中的同系物为Shrb(Shrub)，在人类的同系物为CHMP4，其存在于除古细菌外的其它任何物种(Babst等，2002；McMillan等，2016)。Snf7是一种可溶性卷曲螺旋蛋白，含有高度结构化的“四核”螺旋结构域。Snf7的功能包括：1)自噬；2)与去泛素酶的相互作用(DUB)招募DUB到ESCRT途径；3)多囊泡体内腔内囊泡(ILV)形成MVB；4)细胞分裂(Lata等，2008；Obita等，2007；Ramaseshadri等，2013；等，2014)。

Snf7虽为绝大部分生物生命活动中的必需蛋白，但在昆虫中的研究还较少，其中以果蝇和西方玉米根甲虫(western cornrootworm，WCR，Diabrotica virgiferavirgifera)中的研究最多。Sweeney等通过对果蝇Shrub(即果蝇的Snf7)突变体的研究，发现Shrb在昆虫的神经形态发生中发挥重要作用(Sweeney等，2006)。Baum等通过西方玉米根甲虫的RNAi实验，发现极低剂量的dsDvSnf7就可导致WCR致死(Baum等，2007)。随后Bolognesi等通过RNAi技术干涉WCR幼虫中的Snf7基因的表达，发现试验组幼虫相于对照组生长明显被阻碍，且分别以50ng/ml和1000ng/ml的剂量饲喂幼虫24h后会造成90.3％和94.6％的致死率(Bolognesi等，2012)。对玉米根甲虫饲喂dsDvSnf7后，发现泛素化蛋白在幼虫组织中积累，阻碍了中肠和脂肪体的细胞自噬而导致幼虫死亡(Ramaseshadri等，2013)。

目前，针对昆虫杀虫剂的研究较多，但主要集中的是昆虫特有基因，如:蜕皮激素受体(Ecdysone receptor，EcR)和几丁质合成酶(chitin synthase，CHS)(Wu等，2012；Wang等，2012)。这些杀虫剂的主要优点是针对大部分昆虫，是一种宽谱杀虫剂，但其相对安全性不高，且对昆虫的致死效率有限，这极大地限制了昆虫特有基因杀虫剂的使用。由于Snf7对昆虫生长发育起至关重要的作用，已有研究者通过设计特异性片段，获得了高效安全的仅针对西方玉米根甲虫的窄谱杀虫剂。通过对褐飞虱Snf7这一管家基因进行特异性片段设计，将有助于我们筛选到新的针对褐飞虱的高效安全的窄谱杀虫剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点和不足，提供一种针对褐飞虱防治效果显著的高效安全性杀虫dsRNA。

本发明的另一个目的是提供所述高效安全性杀虫dsRNA的制备方法。

本发明的再一个目的是提供所述高效安全性杀虫dsRNA在制备用于防治褐飞虱的药物中的应用。

本发明的又一个目的是提供使用所述高效安全性杀虫dsRNA防治褐飞虱的方法。