[发明专利]一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法

说明书

本发明提供了一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法，包括以下步骤：1)将NaCl溶液浸泡处理过的黑果枸杞种子接种于MS培养基中进行培养获得无菌苗；2)剪取所述无菌苗的叶片接种于含NaCl的胚性愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织培养获得胚性愈伤组织颗粒；3)将所述胚性愈伤组织颗粒接种于NaCl胁迫不定芽诱导培养基中进行不定芽培养获得不定芽；4)对所述获得的不定芽进行NaCl胁迫培养获得预耐盐不定芽；5)对所述获得的预耐盐不定芽进行EMS诱变处理后筛选耐盐不定芽；6)将所述获得的耐盐不定芽进行生根培养获得黑果枸杞耐盐试管苗。所述方法有利于培养出耐盐性状更加稳定、不易发生变异的黑果枸杞耐盐突变体。

技术领域

本发明属于黑果枸杞育种技术领域，具体涉及一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法。

背景技术

黑果枸杞(Lycium ruthencium)，属于茄科枸杞属，为多棘刺灌木，多分枝，枝条坚硬，常呈之字形弯曲，白色。黑果枸杞分布于中国青海、宁夏、新疆、甘肃等地及欧洲中亚，属于典型的荒漠植物，对环境条件适应能力极强，具有抗旱、耐寒、耐贫瘠、耐盐碱的特点。

黑果枸杞是重要的经济植物及药食兼用的佳品，其果实可入药，具有增强免疫力、延缓衰老、预防癌症、改善睡眠等功效。目前，由于全球气候变暖、人口增长、工业污染、化肥使用不当等因素，土壤盐渍化程度仍存在逐年加重的趋势，并成为阻碍植物生长发育及的重要因素之一，尤其是干旱荒漠区众多环境因子及其恶劣的情况下。据不完全统计，世界盐渍土的面积约1×10⁹hm²，我国盐碱土总面积约有3×10⁷hm²。近年农林业生产中广泛采用人工方法进行黑果枸杞的种苗繁殖，主要包括种子繁殖、扦插繁殖、组织培养、水培等等，但由于这些方法均不能完全模拟黑果枸杞野外生长的气候、水分、土壤等环境条件，使繁殖所得的苗木优良的遗传性状如耐盐性大大降低。

通过耐盐突变体的筛选能够使黑果枸杞获得优良的耐盐性状，能够在盐渍化土壤中生长和繁殖，常规育种途径能够选育耐盐黑果枸杞，但常规的非盐碱条件下的选育使品种耐盐性遗传变异非常有限，且易丢失，大多缺乏抗盐种质资源。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法，所述方法在无性繁殖的基础上，诱导黑果枸杞植株产生稳定、耐盐性状不易丢失的耐盐突变体，同时满足黑果枸杞种苗扩繁与抗逆性筛选的要求，为黑果枸杞种质资源保存提供了良好的技术支撑。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种黑果枸杞耐盐突变体的离体筛选方法，包括以下步骤：1)将NaCl溶液浸泡处理过的黑果枸杞种子接种于MS培养基中进行培养获得无菌苗；2)剪取所述无菌苗的叶片接种于含NaCl的胚性愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织培养获得胚性愈伤组织颗粒；3)将所述胚性愈伤组织颗粒接种于NaCl胁迫不定芽诱导培养基中进行不定芽培养获得不定芽；4)对所述获得的不定芽进行NaCl胁迫培养获得预耐盐不定芽；5)对所述获得的预耐盐不定芽进行EMS诱变处理后筛选耐盐不定芽；6)将所述获得的耐盐不定芽进行生根培养获得黑果枸杞耐盐试管苗。

优选的，步骤1)中所述的NaCl溶液浸泡处理中NaCl溶液的浓度为80～150mg/L。

优选的，步骤1)中所述的NaCl溶液浸泡处理包括两次高温浸泡-低温浸泡；所述高温浸泡的温度为38～42℃，所述高温浸泡的时间为1.5～2.5h；所述低温浸泡的温度为12～17℃，所述低温浸泡的时间为1.5～2.5h。

优选的，步骤1)中所述的培养获得无菌苗的过程包括3～5d暗培养和2～10d光照培养。

优选的，步骤2)中所述的胚性愈伤组织诱导培养基为包括0.5～1.5mg/L的6-BA，0.2～0.8mg/L的NAA，300～500mg/L的脯氨酸和30～35g/L的蔗糖的MS培养基；所述胚性愈伤组织诱导培养基的pH值为5.5～6.0。