[发明专利]脑胶质瘤相关间充质干细胞参与肿瘤血管拟态的检测方法

说明书

本发明公开了脑胶质瘤相关间充质干细胞参与肿瘤血管拟态的检测方法。该方法包括以下步骤：（1）将gbMSCs进行诱导向血管周细胞分化；（2）将gbMSCs来源血管周细胞检测，包括免疫荧光法、流式细胞术、westen‑blot assay和血管生成试验；（3）将gbMSCs来源血管周细胞通过ELISA实验进行细胞因子检测；（4）将gbMSCs来源血管周细胞通过基因芯片技术进行miRNA修饰检测。通过对gbMSCs的分化诱导、周细胞检测、关键细胞因子检测、miRNA修饰检测以及细胞管结构形态的比对来确定脑胶质瘤相关间充质干细胞来源血管周细胞参与肿瘤血管拟态的作用，为胶质瘤的靶向治疗提供了有力的条件，同时也开发了细胞的更多生物特性。

技术领域

本发明涉及细胞检测技术领域，具体涉及脑胶质瘤相关间充质干细胞参与肿瘤血管拟态的检测方法。

背景技术

脑胶质瘤是起源于脑部神经胶质细胞，是最常见的颅内肿瘤，约占所有颅内肿瘤的45%左右。在儿童恶性肿瘤中排第二位，近30年来，原发性恶性脑肿瘤发生率逐年递增，年增长率约为1.2%,中老年人群尤为明显。中国脑胶质瘤年发病率为3-6人/10万人，年死亡人数达3万人。

脑胶质瘤在发生之初，通常没有典型的症状。随着肿瘤的不断增大，会表现出如下症状：一是颅内压增高和其他一般症状，如头痛、呕吐、视力减退、复视、癫痫发作和精神症状等。另一是脑组织受肿瘤的压迫、浸润、破坏所产生的局部症状，局部症状依肿瘤生长位置不同而异。

胶质瘤系浸润性生长物，它和正常脑组织没有明显界限，难以完全切除，对放疗化疗不甚敏感，非常容易复发，生长在大脑等重要部位的良、恶性肿瘤，手术难以切除或根本不能手术。化学药物和一般抗肿瘤的中药，因血脑屏障等因素的影响，疗效也不理想，因此脑胶质瘤至今仍是全身肿瘤中预后最差的肿瘤之一。

胶质瘤的生长和快速繁殖与其肿瘤微环境有着密切的联系，尤其是在肿瘤的生长过程中，肿瘤周围会出现大量的新血管系统，这些新血管的形成为肿瘤的快速增长提供着关键的生长环境和营养物质，所以控制新血管的形成是遏制肿瘤增长的有效办法，但是目前仍无法确定肿瘤新血管是由肿瘤微环境下何种细胞刺激分化而成，在肿瘤微环境下存在多种具有不同生物特性的细胞，所以对细胞生物特性的检测研究成为现代医学研究的方向，通过检测确定得到目标细胞，进而进行靶向控制或者治疗，以达到治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提出脑胶质瘤相关间充质干细胞（glioma-associated mesenchymal stem cells, gbMSCs）参与肿瘤血管拟态的检测方法，进而通过血管周细胞的诱导分化，通过多种方式联合检测确定周细胞分化，确定脑胶质瘤相关间充质干细胞参与肿瘤血管拟态。

本发明提出脑胶质瘤相关间充质干细胞参与肿瘤血管拟态的检测方法，包括以下步骤：

（1）将脑胶质瘤相关间充质干细胞进行血管周细胞诱导分化；

（2）将脑胶质瘤相关间充质干细胞来源血管周细胞检测，包括免疫荧光法、流式细胞术、westen-blot assay和血管生成试验；

（3）将脑胶质瘤相关间充质干细胞来源血管周细胞通过ELISA实验进行细胞因子检测；

（4）将脑胶质瘤相关间充质干细胞来源血管周细胞通过基因芯片技术进行miRNA修饰检测。

由于肿瘤环境中新血管的形成大部分为具有一定分化潜能的细胞分化而成，所以在体外对目标细胞进行诱导分化，确定其是否分化潜能，如具有分化潜能，即可进行进一步的检测研究。