[发明专利]一种融合蛋白PTEN-L-p53及其应用在审
| 申请号： | 201810337671.5 | 申请日： | 2018-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN108484780A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 季少平;房娜;肖曼;王树真 | 申请（专利权）人： | 河南大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K38/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 时立新 |
| 地址： | 475001*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 融合蛋白 前导序列 申请 制备 融合 应用 制备融合蛋白 肿瘤抑制功能 内源性蛋白 治疗性蛋白 蛋白制备 免疫原性 筛选鉴定 细胞功能 抑制侵袭 抑制肿瘤 肿瘤治疗 酶切 自由 细胞 转化 表现 研究 | ||
1.一种融合蛋白PTEN-L-p53，其特征在于，该融合蛋白通过如下步骤制备获得：
（1）序列扩增及融合
对PTEN-Long前导序列和TP53分别进行PCR扩增，
所述PTEN-L前导序列，包括519bp，碱基序列如SEQ ID NO.1所示；
采用PCR扩增方式，对PTEN-L前导序列进行扩增，PCR扩增时引物序列设计如下：
正向引物：5'-AAGCTTGCTGGAGCGGGGGGGAGAAGC-3'，
反向引物：5'-TCCATTGATCCTCCTCCTCCGTCTGGGAGCCTGTGGCTGA-3'；
所述TP53序列，包括1179bp，碱基序列如SEQ ID NO.2所示；
采用PCR扩增方式，对TP53序列进行扩增，PCR扩增时引物序列设计如下：
正向引物：5'-CAGACGGAGGAGGAGGATCAATGGAGGAGCCGCAGTCAGA-3'，
反向引物：5'-CTCGAGAGTCTGAGTCAGGCCCTTCTG-3'；
（2）融合PCR制备PTEN-L-p53融合序列
所述PTEN-L-p53融合基因序列，包括1713bp，碱基序列如SEQ ID NO.3所示；
以步骤（1）中所回收的PTEN-L 前导序列的PCR扩增产物和TP53的PCR扩增产物为模板，融合PCR扩增时，引物序列设计如下：
正向引物：5'-AAGCTTGCTGGAGCGGGGGGGAGAAGC-3'，
反向引物：5'-CTCGAGAGTCTGAGTCAGGCCCTTCTG-3'；
（3）酶切与连接
对pSecTag2 A载体进行酶切，并与步骤（2）中的PTEN-L-p53融合序列进行连接；
（4）转化与筛选鉴定
将步骤（3）中的连接产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞，并筛选转化正确菌株，验证正确后，提取质粒获得pSecTag2 A-PTEN-L-p53重组载体；
将所获得的构建正确的重组载体进一步转化表达细胞后进行表达，即可获得融合蛋白PTEN-L-p53。
2.权利要求1所述融合蛋白PTEN-L-p53在制备肿瘤药剂中的应用，其特征在于，该蛋白能够自由地进出细胞进而抑制肿瘤细胞的增殖。
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