[发明专利]一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备预作用复合物

将模版分子细胞色素c、巯基修饰的细胞色素c核酸适配体溶解于磷酸缓冲液中，再加入甲基丙烯酸和交联剂，在温度为37℃的条件下，反应12小时，制得预作用复合物；

2)制备核酸适配体—量子点复合物

向步骤1)获得的预作用复合物通入氮气20分钟，排除空气，加入双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点和引发剂，再加入磷酸缓冲液，在温度为37℃、氮气保护的条件下，反应12小时，制得核酸适配体—量子点复合物；

3)洗脱模版分子细胞色素c

将步骤2)获得的核酸适配体—量子点复合物在转速为12000rpm的条件下离心10分钟，去掉上清液，用洗脱液除去核酸适配体—量子点复合物中的模版分子细胞色素c，得到核酸适配体-分子印迹荧光传感器。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：巯基修饰的细胞色素c核酸适配体的序列为5’-HS-(CH₂)₆-CCGTGTCTGGGGCCGACCGGCGCATTGGGTACGTTGTTGC-(CH₂)₆-SH-3’。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述模版分子细胞色素c、巯基修饰的细胞色素c核酸适配体和甲基丙烯酸的摩尔比为1:1:(80-120)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点由以下步骤制备所得：

S1：取巯基丙酸修饰的锰掺杂硫化锌量子点与体积分数为50％的乙醇混合，搅拌15分钟，再加入正硅酸乙酯和氨水，搅拌反应2小时，继续加入KH570，反应4小时；

S2：步骤S1的反应液在转速为12000rpm的条件下离心10分钟，去掉上清液，分别用乙醇和水洗涤数次，得到双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述巯基丙酸修饰的锰掺杂硫化锌量子点、水、乙醇、正硅酸乙酯、氨水和KH570的摩尔体积比为1mol:(310-315)L：(1.2-1.3)L：(2.5-2.6)L：(0.12-0.13)L。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述模版分子细胞色素c和双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点摩尔比为1：(675-750)。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述交联剂为N,N’-亚甲基双丙烯酰胺；所述模版分子细胞色素c和N,N’-亚甲基双丙烯酰胺的摩尔比为1:(4400-4600)。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述引发剂为四甲基乙二胺和过硫酸铵；所述模版分子细胞色素c和四甲基乙二胺的摩尔体积比为1mmol：(30-40)L；所述模版分子细胞色素c和过硫酸铵的摩尔比为1：(900-980)。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述磷酸缓冲液的摩尔浓度为10mmol/L，pH值为7-8；和/或，所述洗脱液为质量分数为5％的十二烷基磺酸钠溶液。

10.一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器，其特征在于：所述核酸适配体-分子印迹荧光传感器为根据权利要求1—9中任意一项所述的制备方法制备获得的。