[发明专利]一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器及其制备方法

说明书

本发明提供一种用于检测细胞色素c的核酸适配体‑分子印迹荧光传感器的制备方法，其包括以下步骤：首先，由模版分子细胞色素c、巯基修饰的细胞色素c核酸适配体、甲基丙烯酸和交联剂形成预聚合复合物；然后，由预聚合复合物、双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点和引发剂形成核酸适配体‑量子点复合物；最后，将核酸适配体‑量子点复合物中模版分子细胞色素c洗脱，得到核酸适配体‑分子印迹荧光传感器。本发明还提供一种有上述制备方法制备出的一种用于检测细胞色素c的核酸适配体‑分子印迹荧光传感器。本发明的核酸适配体‑分子印迹荧光传感器对细胞色素c具有双重特异性识别，对细胞色素c有很好的选择性。

技术领域

本发明属于生物医学分析化学领域，具体涉及一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器及其制备方法。

背景技术

细胞色素c(Cytochrome c，Cyt c)是一种以铁卟啉为辅基的可溶性色素蛋白，普遍存在于生物体中，是构成细胞呼吸链的主要成员之一。作为细胞凋亡的信息物质，细胞色素c在研究细胞凋亡过程的病理学、药理学以及线粒体变化的过程中具有非常重要的作用。目前,常用细胞色素c的检测方法为双抗夹心法。然而，抗体的物理和化学性质不稳定，在体外容易导致失活。抗体的筛选和生产过程繁琐，导致其生产成本高昂，对抗体在蛋白质检测中应用的发展受到限制。

核酸适配体是一种对靶物质有特异性识别能力的单链的核苷酸，有望成为抗体的替代物，在生物分析领域有巨大的应用潜力和多样性的应用范围。适配体在体外通过指数富集的配基系统进化技术筛选获得核酸序列，对目标物有高度的亲合力和特异性，因而非常适合用作识别探针。另外，核酸适配体有许多优点，如无毒、化学稳定性好、价格便宜、容易被修饰、序列设计灵活多变、无免疫原性及可以高亲和性和特异性得结合几乎任何目标分子如小分子、蛋白甚至微生物和细胞。

分子印迹聚合物作为一种识别元件，近年来获得了持续的关注，并广泛应用于纯化分离、化学/生物传感和药物递送等领域。由于其在空间和大小方面为模板分子量身定做了互补的结合位点，分子印迹聚合物能够高特异性和选择性的识别模板分子。相比于传统的识别元件，分子印迹聚合物制备成本低、物理稳定性好、可以多次循环使用。但是，不同于小分子的印迹，印迹模板体积太大，结构复杂且容易发生变化，印迹的难度也大大增大。因此，对诸如细胞色素c这种蛋白质大分子进行印迹仍然存在许多难题。

考虑到适配体和分子印迹各自独特的优点，以及荧光纳米材料半导体量子点具有荧光颜色可调、发射峰窄而对称、激发波长范围大等特点。因此，开发一种以半导体量子点作为支撑，巯基修饰的核酸适配体和甲基丙烯酸为功能单体，结合巯基-双键点击反应以及自由基聚合，制备出的一种对细胞色素c具有双重特异性识别的核酸适配体-分子印迹荧光传感器，用来快速、灵敏和专一性的检测样品中的细胞色素c。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术所存在的不足，提供一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器的制备方法，其步骤简单、反应条件温和、反应速度快；所制备出的核酸适配体-分子印迹荧光传感器能快速、灵敏和专一性的检测样品中的细胞色素c。

为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：

一种用于检测细胞色素c的核酸适配体-分子印迹荧光传感器的制备方法包括以下步骤：

1)制备预作用复合物

将模版分子细胞色素c、巯基修饰的细胞色素c核酸适配体溶解于磷酸缓冲液中，再加入甲基丙烯酸和交联剂，在温度为37℃的条件下，反应12小时，制得预作用复合物；

2)制备核酸适配体—量子点复合物

向步骤1)获得的预作用复合物通入氮气20分钟，排除空气，加入双键修饰的锰掺杂硫化锌量子点和引发剂，再加入磷酸缓冲液，在温度为37℃、氮气保护的条件下，反应12小时，制得核酸适配体—量子点复合物；

3)洗脱模版分子细胞色素c