[发明专利]一种分离纯化裸藻藻种的方法

权利要求书

1.一种分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、选取含有裸藻细胞的水样或含有杂菌的裸藻藻液，接入按配好的营养盐得到的无菌培养基后，用酸调节pH值至3-4，在调好的光强条件下培养，光强为3000lx，营养盐包含的成分为：硝酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁0.1g/L，氯化钙0.1g/L，柠檬酸钠1g/L，VB110μg/L，VB12 0.1μg/L，氯化铁0.588mg/L，氯化锰0.108mg/L，硫酸锌0.078mg/L，氯化钴0.012mg/L，钼酸钠0.0075mg/L；

B、步骤A得到的藻液经收集后进行稀释，然后转入新的灭菌培养装置中；

C、将培养装置的部分区域按给定量的光强施加照射，将培养装置的一部分用不透光材料遮盖，另外一部分施加3000lx的光强；光强处理时间为15min-2h；

D、取照光部位部分藻液，稀释后，接种在培养孔板中进行培养，培养条件为：光照度2500lx，温度22-25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培养2-5d；

E、将培养孔板中的藻株进行镜检和菌类检测，即可挑选出纯种藻株。

2.如权利要求1所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤A采用的酸为包括硫酸、盐酸、硝酸或磷酸的无机酸，配置成1M浓度。

3.如权利要求2所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤A中培养采用的光强为3000lx，在调好的光强条件下，以及在静置处理或者通入空气或混合气体的条件下，培养2-7d。

4.如权利要求1所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤B中，对藻液用无菌水或生理盐水将藻细胞浓度稀释成10-10³个/mL，培养装置选用无菌试管或大培养皿。

5.如权利要求1所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：步骤D中，采用无菌培养基进行稀释；藻液浓度稀释成10-10³个/mL；从照光部位取液体50-300μl，接种于无菌培养孔板中。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、选取含有裸藻细胞的水样或含有杂菌的裸藻藻液，加入营养盐，其配方为：硝酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁0.1g/L，氯化钙0.1g/L，柠檬酸钠1g/L，VB1 10μg/L，VB120.1μg/L，氯化铁0.588mg/L，氯化锰0.108mg/L，硫酸锌0.078mg/L，氯化钴0.012mg/L，钼酸钠0.0075mg/L，接入无菌培养基后，用酸调节pH值至3.5，在3000lx光强条件下，以及在静置处理或者通入空气或混合气体的条件下，培养3d；

B、步骤A得到的藻液，经收集后进行稀释，将藻细胞浓度稀释成10-10²个/mL，随后培养，培养装置采用100mL试管；

C、将试管下部用不透光材料遮盖，上部照射3000lx的光强15-30min；

D、从照光部位取50-100μL藻液，稀释后，接种在培养孔板中进行培养，培养条件为：光照度2500lx，温度22-25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培养2-5d；

E、将培养孔板中的藻株进行镜检和菌类检测，即可挑选出纯种藻株。

7.如权利要求6所述的分离纯化裸藻藻种的方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、选取含有裸藻细胞的水样或含有杂菌的裸藻藻液，加入营养盐，其配方为：硝酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，硫酸镁0.1g/L，氯化钙0.1g/L，柠檬酸钠1g/L，VB1 10μg/L，VB120.1μg/L，氯化铁0.588mg/L，氯化锰0.108mg/L，硫酸锌0.078mg/L，氯化钴0.012mg/L，钼酸钠0.0075mg/L，接入无菌培养基后，用1M的HCl调节pH值至3.5，在3000lx光强条件下，通入含有CO₂ 5％的混合气体培养3d，培养温度为25±2℃；

B、步骤A得到的藻液，经收集后进行稀释，将藻细胞浓度稀释成10-10²个/mL，随后培养，培养装置采用100mL试管；

C、将试管下部用不透光材料遮盖，上部照射3000lx的光强30min；

D、从照光部位取100μL藻液，稀释后，接种在培养孔板中进行培养，培养条件为：光照度2500lx，温度25℃，光暗比L:D＝12h:12h，培养3d；

E、将培养孔板中的藻株进行镜检和菌类检测，即可挑选出纯种藻株。