[发明专利]一种南果梨愈伤组织、培养方法及应用在审
| 申请号： | 201810344855.4 | 申请日： | 2018-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN108496802A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 王爱德;李馨玥;岳鹏涛;刘伟婷;袁晖 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 俞晓明 |
| 地址： | 110866 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 愈伤组织 南果梨 质地 次氯酸钠溶液 植物愈伤组织 继代培养基 无菌水清洗 诱导培养基 分散性好 浸泡消毒 生长缓慢 体积分数 乙醇溶液 疏松状 生长 变黑 无菌 应用 果实 老化 培育 | ||
1.一种南果梨愈伤组织的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，取成熟且完整的南果梨果实，依次用体积分数70％乙醇溶液和1.8g/100ml的次氯酸钠溶液浸泡消毒，无菌水清洗，得到无菌果实；
S2，将所述无菌果实去皮，然后切下果肉，平铺到诱导培养基中，25～28℃暗培养，直至长出愈伤组织，得到带有愈伤组织的果肉；
所述诱导培养基按以下方法配制：1L水中加入7g琼脂粉，煮沸至琼脂粉完全溶解，然后加入4.74g MS固体培养基，溶解后加入30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入2mg的2,4-D和1.5mg的6-BA；
S3，取出带有愈伤组织的果肉，切下愈伤组织，置于继代培养基中，25～28℃暗培养，28-32d继代一次，直至获得白色疏松南果梨愈伤组织。
2.根据权利要求1所述的南果梨愈伤组织的培养方法，其特征在于，S1的具体步骤为：南果梨果实保留2～4cm长的果柄，先在体积分数70％乙醇溶液中浸泡消毒1min，再放入1.8g/100ml的次氯酸钠溶液浸泡消毒30min，无菌水清洗4～5次，得到无菌果实。
3.根据权利要求1所述的南果梨愈伤组织的培养方法，其特征在于，S2中，切下的果肉的厚度为1mm。
4.根据权利要求1所述的南果梨愈伤组织的培养方法，其特征在于，S3中，所述继代培养基按以下方法配制：1L水中加入7g琼脂粉，煮沸至琼脂粉完全溶解，然后加入4.74g MS固体培养基，溶解后加入30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入2.5mg的2,4-D和1mg的6-BA。
5.根据权利要求1～4任一项所述的培养方法培养的南果梨愈伤组织。
6.根据权利要求5所述的南果梨愈伤组织在GUS染色、免疫共沉淀、Pull-down、染色质免疫共沉淀及基因稳定性遗传实验中应用。
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