[发明专利]通过内部标准物质谱检测微生物的内标校正方法

权利要求书

1.一种通过试剂组合物用于飞行时间质谱系统鉴定微生物样品的内标校正方法，步骤包括：

(1)用灭菌牙签挑取部分合适的单菌落于装有10μl组分I的离心管中，进行细胞破碎，蛋白及多肽释放，裂解5分钟；

(2)取上述裂解的溶液1μl加到靶板的孔位上，室温干燥；

(3)取蛋白标准品1μl覆盖到同一孔位上，自然干燥；

(4)打开组分II的微管，移取1μl组分II加到同一孔位上，自然干燥；

(5)靶板放入飞行时间质谱系统中进行检测，其中通过比较内部标准物的待测分子量与实际分子量的差值，为待测微生物特征蛋白的分子量进行校正；

其中，该试剂组合物主要成分包括：组分I：乙腈和甲酸；组分II：乙腈，三氟乙酸和α-氰基-4-羟基肉桂酸；组分Ⅲ：1000Da平均分子量3000Da和12000Da平均分子量20000Da的内部标准物，

其中所述内部标准物选自1000Da平均分子量2000Da的多肽P(33507-63-0)和/或多肽P14R(syntheticpeptide)；和/或者，

其中所述内部标准物选自2000Da平均分子量3000Da的多肽ACTH fragment18-39(human)；

以及，其中所述内部标准物选自12000Da平均分子量180000Da的马脱辅基肌红蛋白Apomyoglobin(equine)。

2.如权利要求1所述的校正方法，其中组分I包括：体积百分浓度为50.0％的乙腈、体积百分浓度为35.0％的甲酸，余量为水；组分II包括：体积百分浓度为52.5％的乙腈、体积百分浓度为2.5％的三氟乙酸、15mg/ml的α-氰基-4-羟基肉桂酸，余量为水。

3.如权利要求1或2所述的校正方法，其中所述微生物检测是确定微生物的属、种、亚种或亚型；或是非诊断目的地检测致病菌、污染菌、耐药菌，或具有诊断目的的致病菌。

4.如权利要求3所述的校正方法，其中微生物是环境污染中的微生物、食品检疫中的微生物、进出口商品中的微生物、药物研究中耐药性微生物，所述微生物包括原核微生物、真核微生物。

5.如权利要求4所述的校正方法，其中所述原核微生物包括细菌，所述真核微生物为真菌包括酵母菌、霉菌。