[发明专利]一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用

权利要求书

1.一种芍药根茎组织的徒手切片方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、获取洁净新鲜的芍药根茎组织，脱水至含水率为5-10％；

S2、用刀片对步骤S1得到的芍药根茎组织沿垂直于其纵轴方向切削，获得厚度为20-30μm的切片；

S3、将步骤S2得到的切片置于无水乙醇中去除多余水分后，置于蒸馏水中完全展开，即得。

2.根据权利要求1所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S2中，所述切削具体为：用左手大拇指和食指上下捏紧距离步骤S1得到的根茎组织端部切口约0.8-1.2cm处，使根茎组织纵向倾斜25-35°，将小拇指置于左上方实验台上作为支撑，右手大拇指和食指捏紧刀片端部，将刀片刀刃紧靠削平的根茎组织的端面，初切时用力将刀刃稍向下压，然后从右上方往左下方的方向连续迅速地平行切削。

3.根据权利要求1或2所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S1中，所述脱水具体为：当所述芍药根茎组织为肉质根或嫩茎时，依次置于梯度浓度的乙醇溶液中浸泡脱水，优选地，所述乙醇溶液的梯度浓度依次为50％、70％、85％、95％、100％、100％，各梯度浓度的乙醇溶液中的脱水时间为0.8-1.2h；当所述根茎组织为盛花期茎秆时，置于无水乙醇中浸泡5-10min。

4.根据权利要求1-3任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S3中，将所述切片置于无水乙醇中的浸泡时间为1-2min。

5.根据权利要求1-4任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S3中，将所述切片置于蒸馏水中完全展开具体为：取洁净载玻片，滴加0.5-1ml蒸馏水，用显微镊将切片置于蒸馏水上，待所述切片完全展开后，缓慢加盖盖玻片完全覆盖所述切片。

6.根据权利要求1-5任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S1中，所述根茎组织控制为5-7.5cm长的节段。

7.根据权利要求1-6任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，所述步骤S1还包括，在脱水前将所述根茎组织的两端沿与其生长相垂直的方向削平。

8.根据权利要求1-7任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，所述刀片为不锈钢双面刀片，用作切片时将刀片对半折断。

9.根据权利要求1-8任一项所述的徒手切片方法，其特征在于，步骤S1中，所述根茎组织选自不同发育时期正常生长的芍药肉质根和茎秆，取样时将所述根茎组织冲洗干净后放入含有吸水纸的自封袋中并置于冰上保存。

10.一种权利要求1-9任一项所述徒手切片方法的应用，其特征在于，将所述切片置于显微镜下进行观察，拍照，所述拍照在切片完成后的15min内完成。