[发明专利]一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用

说明书

本发明公开了一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用，徒手切片方法包括，获取洁净新鲜的芍药根茎组织，脱水至含水率为5‑10％，用刀片对上述得到的根茎组织沿垂直于其纵轴方向切削，获得20‑30μm厚的切片，将上述切片置于无水乙醇中去除多余水分后，置于蒸馏水中完全展开即得；该切片方法的应用，将切片置于显微镜下进行观察，拍照，且拍照在切片完成后的15min内完成。本发明所提供的徒手切片方法操作简单，切片效率高，成本低廉，能彻底解决现有石蜡切片方法实验条件严苛、操作过程复杂、使用有毒试剂及实验投入的时间和经费较大等问题，所用工具简单易得，价格低廉，不使用有毒试剂，绿色环保，应用广泛，理论和实际意义重大。

技术领域

本发明属于植物组织切片技术领域，具体涉及一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用。

背景技术

中国是世界芍药属的起源中心之一，其在我国具有悠久的栽培和应用历史，其花大艳美，多为著名的药用观赏植物，深受我国及世界人民的喜爱。肉质根是芍药属植物的物质储存中心，不仅为植物的正常生长和发育提供强大的能量供给，也是其药用成分提取的主要来源；茎的形成和发育的状况直接关系开花状态的好坏，是观赏性状得以形成的基础，对开花的数量、质量及产量等都有直接影响。

芍药属植物种类繁多，地域分布差异较大，不同种及种内不同品种间的根茎的形态及结构存在较大的差异，因而芍药属植物的根茎结构解剖研究在植物系统分类、生长发育、栽培繁殖、花期调控和抗逆研究等方面具有重要的理论价值和现实意义。

传统上，对芍药属植物的根茎解剖研究较少，研究方法主要是石蜡切片法。同时，芍药属植物的根茎特性受发育时期影响较大，同时石蜡切片法对实验条件要求较为严苛，试验过程复杂繁琐，从材料固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色等需要经历一个较长的实验周期，其中每个环节都直接影响最终的实验效果，难以进行大规模直接推广的应用，需要根据材料进行实验条件的摸索，实际应用难度较大；同时，其需要使用二甲苯等有毒试剂进行透明及脱蜡处理，目前虽然已有相关无毒试剂替代，但是实验周期及成本仍然较高，效率仍有待提高。

对于科研工作者来说，好的切片方法的关键在于：1、切片能清晰、真实地反映实物；2、方法具有通用性，不受品种及发育阶段差异的限制；3、节省时间和经济成本、操作简单、环保、高效。

现有的切片方法不能完全满足上述条件，因而表现出一定的不足。综上所述，建立一种操作过程简单易学且绿色环保，所获得的图谱清晰且立体感强，能对不同发育时期的根茎组织进行快速、高效的解剖观察的徒手切片方法，是本领域急需解决的关键技术问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种芍药根茎组织的徒手切片方法及其应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种芍药根茎组织的徒手切片方法，包括以下步骤：

S1、获取洁净新鲜的芍药根茎组织，脱水至含水率为5-10％；

S2、用刀片对步骤S1得到的根茎组织沿垂直于其纵轴方向切削，获得厚度为20-30μm的切片；

S3、将步骤S2得到的切片置于无水乙醇中去除多余水分后，置于蒸馏水中完全展开，即得。

上述徒手切片方法直接利用芍药属植物茎、根茎和根的新鲜材料进行操作，实验操作条件容易摸索，省去大量传统方法所需材料固定时间及繁琐、严苛的实验流程，极大地缩短了实验周期，极大地提高了实验效率；且实验过程无需使用任何传统方法所使用的有毒试剂，适合在普通实验环境条件下操作，方法可移植性强，操作要求较低，适用性极强。所得图片清晰，结果可靠。