[发明专利]从鸡血中提取抑菌肽的方法

权利要求书

1.从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：将新鲜鸡血用含有脂肪酸甲脂和三乙胺的六偏磷酸钠水溶液进行抗凝处理，然后配制发酵培养基，接种黑曲霉发酵得发酵液，发酵液经超滤、凝胶柱层析，即得鸡血抑菌肽。

2.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述鸡血抗凝处理的具体步骤为：按体积比为1:4-6向新鲜鸡血中加入浓度为2-4%的六偏磷酸钠水溶液，搅拌均匀，离心上清液冷冻干燥，即得抗凝鸡血粉。

3.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述六偏磷酸钠水溶液含有0.02-0.03mM脂肪酸甲脂和0.015-0.018mM三乙胺。

4.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述发酵培养基的成分及其重量份为：抗凝鸡血粉5-10份、蔗糖18-22份、氯化钠4-6份、氯化锌0.004-0.006份、磷酸二氢钾1.8-2.4份、硫酸镁0.3-0.5份、硫酸铁0.005-0.015份、维生素B₁0.001-0.002份、无菌水900-1100份。

5.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述黑曲霉发酵的具体步骤为：调节发酵培养基的pH至5.5-6.5，然后按接种量为5-7%接种黑曲霉，在温度为25-30℃、转速为120-170r/min的条件下培养2-3d，然后按添加量为7-9g/L加入鼠李糖，继续发酵10-15h，离心上清液即为发酵液。

6.根据权利要求5所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述鼠李糖中L-鼠李糖和D-鼠李糖的重量比为100:2.57-2.63。

7.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述超滤步骤为：将酶解液经截留分子量为2-4kDa的超滤膜进行超滤，获得2-4kDa以下的肽混合物，再经400-600Da的纳滤膜纳滤，获得400-600Da以上的抗菌肽粗提液，备用。

8.根据权利要求1所述的从鸡血中提取抑菌肽的方法，其特征在于：所述凝胶柱层析步骤为：用双蒸水平衡层析柱，将抗菌肽粗提液进行凝胶层析，上样后用双蒸水洗脱，流速为0.4-0.6mL/min，自动部分收集器定时收集，检测每管收集液在214nm处的吸光值A214，测定各管收集液的抗菌活力，收集抗菌活性较高的组分，冷冻干燥即得鸡血抗菌肽。